Hallazgos histológicos y ultraestructurales en áreas de displasia cortical focal de pacientes pediátricos intervenidos por epilepsia refractaria

Resumen

Las malformaciones del desarrollo cortical (MDC) comprenden un amplio grupo de enfermedades malformativas del desarrollo de la corteza cerebral, que pueden conducir a crisis epilépticas, habitualmente refractarias a tratamiento médico, en la infancia o la juventud. La displasia cortical focal (DCF) es reconocida como una de las MDC más epileptogénica y se clasifica en tres subtipos dependiendo del tipo de diseminación cortical (radial o tangencial) y la presencia o ausencia de alteraciones citológicas (neuronas dismórficas y/o células en balón). Muchas proteínas relacionadas con la migración neuronal y neurogénesis, como la Doblecortina (DCX) se han estudiado en este tipo de patologías. La DCX es una proteína asociada a microtúbulos ampliamente utilizada para marcar neuronas migratorias (radiales y tangenciales) durante el desarrollo cortical, así como neuronas inmaduras en nichos neurogénicos postnatales en roedores y humanos. En pacientes epilépticos, se ha descrito la presencia de células DCX positivas en casos de DCF y de epilepsia del lóbulo temporal. Sin embargo, debido a la dificultad de una fijación óptima de las muestras humanas, la ultraestructura de estas células y el medio que les rodea sigue siendo una incógnita. El objetivo de nuestro estudio es analizar y describir la estructura, contactos específicos y medio que envuelve a células neuronales y gliales en un grupo de once pacientes pediátricos diagnosticados de DCF y esclerosis tuberosa (ET) con epilepsia parcial compleja e intervenidos mediante craneotomía y exéresis de la lesión. Las muestras fueron fijadas inmediatamente después de la cirugía y se procesaron para estudios histológicos, de inmunohistoquímica, marcaje mediante inmuno-oro y examen al microscopio electrónico de transmisión (MET). En la IHQ se utilizaron marcadores de estirpe neuronal: DCX, NeuN, Parvalbúmina (PV), sinaptopfisina y neurofilamentos (SMI32); y marcadores de estirpe glial: GFAP, Vimentina, Olig2, Iba1. Las técnicas de inmuno-oro se realizaron con los marcadores DCX, GFAP, Olig2 e Iba1 para un análisis más exhaustivo al MET. Además, realizamos un recuento de conexiones sinápticas en las muestras de displasia y control, con el objetivo de encontrar diferencias entre ellos. Nuestros resultados sugieren que la ultraestructura de las células DCX positivas es bastante heterogénea y engloba a neuronas inmaduras, maduras y dismórficas, así como también células en balón y algunos astrocitos. De este modo, mediante el estudio de todos estos hallazgos bajo visión al MET podemos esclarecer cómo la expresión anómala de DCX por ciertos tipos celulares puede estar relacionada con la epilepsia.