Desarrollo de metodologías citómicas avanzadas aplicadas al diagnóstico de hemopatías

Resumo

En la presente Tesis se ha aplicado la citometría de flujo como herramienta para la transferencia del laboratorio a la clínica, debido al enorme potencial que tiene para el análisis celular de alto rendimiento a nivel de célula única. En esta Tesis se demuestra la importancia, relevancia y viabilidad de la transferencia de metodologías de citometría de flujo del laboratorio a la práctica clínica, con la intención de generar un beneficio para el paciente a nivel individual y comunitario. Para ello se han llevado a cabo cuatro estudios en los que se explora el potencial de la citometría de flujo de abarcar múltiples niveles de transferencia para permitir implementar mejoras en la práctica clínica. Esto se ha realizado principalmente a través de las metodologías de mínima manipulación posible de la muestra, resultando fundamental para estudiar las células en su estado nativo y permitiendo combinar ensayos de inmunofenotipo y funcionales en células vivas. En un primer nivel, se aplicaron los métodos de mínima manipulación de la muestra, discriminando los dobletes mediante fluorescencia y evitando posibles artefactos debido a las características de las propias células y a la manipulación de los diferentes especímenes, a la vez que se preserva la funcionalidad celular. En el segundo nivel, se ha demostrado como mediante el potencial de los métodos de mínima manipulación de la muestra aplicados en citometría de flujo en combinación con sustratos y marcadores fluorogénicos, permite adaptar otras técnicas y desarrollar nuevas aproximaciones para identificar poblaciones según su fenotipo y función, así como poder ofrecer nuevas oportunidades diagnosticas. En el tercer nivel, se demuestra que la cuantificación de progenitores hematopoyéticos CD34+ mediante sistemas volumétricos reales es comparable con las mediciones obtenidas con el sistema descrito en las recomendaciones internacionales de la ISHAGE basado en microesferas, con la ventaja de evitar errores de cálculo causados por el fenómeno de la desaparición de las microesferas. Y el cuarto nivel, demuestra la sinergia entre la investigación básica y la traslacional, para llevar a cabo la validación de anticuerpos monoclonales para su uso en IVD, apoyando el diagnostico, clasificación y seguimiento de hemopatías, leucemias y linfomas.