Transformación biobalistica de cultivares indican y japónica de Oryza sativa l.Selección en higromicina y expresión estable del inhibidor de Tripsina BTI-CME (CEN ITRL)

Resumen

El arroz (Oryza sativa L.) es uno de los cultivos más importantes del mundo. Se estima que cada año esta especie reduce en un 50% su rendimiento máximo teórico debido a plagas y enfermedades. La finalidad de esta tesis ha sido transferir, integrar y expresar el gen Itrl de cebada, que codifica el inhibidor de tripsina BTI-Cme, a celulas desdiferenciadas(callos) de cultivares indica y japonica de arroz y regenerar plantas completas de arroz a partir de celulas transformadas. Se han establecido sistemas de propagación in vitro de plantas de arroz mediante embriogénesis somática, y se han optimizado las condiciones de transferencia de genes mediante bombardeo de partículas. Se han diseñado construcciones génicas que portan el gen Itrl y genes selectivos que permiten unicamente el crecimiento de las células transformadas en medios selectivos. Utilizando como molde ADN de arroz y como cebadores nucleótidos deducidos de la secuencia del gen Itrl de cebada, se ha amplificado mediante la técnica de PCR un fragmento de ADN del tamaño esperado, pero no se ha detectado la correspondiente proteina en ninguno de los tejidos de arroz no-transgénico analizados (semillas y hojas). Las plantas transformadas seleccionadas han sido analizadas molecular y bioquímicamente. Se han obtenido 12 plantas transgénicas de arros, 7 de la línea IR58 de tipo indica y 5 del cultivar Senia tipo japónica, que portaban el transgén y expresaban la correspondiente proteina. Ensayos invitro de inhibición de tripsina han demostrado la funcionalidad de la proteina BTI-Cme en los arroces transgénicos. Futuros bioensayos con insectos determinaran la capacidad insecticida de dichas plantas.