Transformacion genetica mediada por agrobacterium tumefaciens de fragaria spp. Y lycopersicon esculentum mill

Laburpena

Esta tesis se ocupa, principalmente, de la transformacion genetica mediada por agrobacterium tumefaciens de la especie de fresa silvestre fragaria vesca y del hibrido estable fragariaxannanasa, asi como del tomate cultivar pera. En el primer y segundo caso se trabajo con el vector binario modelo pbi121 y en el tomate con el vector pkylx71 en el que se habia insertado el gen de interes tpx1. Este gen se corresponde con una peroxidasa constitutiva de raiz, aislada en este mismo cultivar. En el caso de fragaria vesca se optimizo un medio de regenracion que incluia benciladenina 17.7 microm e indolbutirico 1.2 microm y posteriormente, el protocolo de transformacion que genero, una vez optimizado, una frecuencia de transformacion en base a la resistencia a kanamicina 13%. En el caso del cultivar chandler de fragariaxananassa, el principal enfasis se realizo en la utilizacion de la fuente de explanto, siendo la utilizacion de un pretratamiento con quinetina del material imprescindible para que el protocolo de transformacion funcione adecuadamente. La frecuencia de transformacion con el protocolo de transformacion optimizado fue del 4.2% en base a la resistencia a kanamicina. En el caso del tomate, se procedio a la transformacion del material utilizando un medio de regeneracion previamente optimizado que incluia benciladenina 8.9 microm y el protocolo de transformacion establecido en fragaria vesca, ligeramente modificado. Las plantas obtenidas sobreexpresaban el gen en hojas y tenian de 4 a 5 veces mas actividad peroxidasa en la fraccion proteica ionicamente unida a pared celular. Este incremento de actividad se debia a la presencia de una isoenzima de pi 8.5 y masa molecular estimada de 41 kd. Estos resultados confirman en buena medida las caracteristicas predichas para tpx1 en base a su secuencia. La biomasa radicular era menor que la de plantas testigos.