Vigilancia ambiental molecular de rotavirus grupo A humanos

Abstract

Los rotavirus del grupo A tienen una gran importancia sanitaria. Se calcula que son causantes de 1200 muertes infantiles diarias en todo el mundo. Se han probado diferentes estrategias inmunoprofílácticas, pero todavía no se dispone de una vacuna efectiva contra rotavirus. Los rotavirus humanos del grupo A presentan gran número de serotipos diferentes dependiendo de su proteína VP7 (G-tipos) y de su proteína VP4 (P-tipos). El conocimiento de las cepas circulantes en la población que se desea proteger es de gran utilidad para el diseño de una vacuna eficaz. Dado que rotavirus tiene una transmisión fecal-oral y se excretan en gran número en las heces de los individuos infectados, decidimos emplear el agua residual cómo muestra representativa de lo que ocurre en una población como Barcelona. Esta tesis describe una metodología novedosa y eficaz para la concentración, detección y cuantifícación de rotavirus a partir de muestras de agua residual. El método de concentración empleado era la liofilización, técnica que permitía no sólo recuperar los virus inoculados artificialmente, sino también eliminar inhibidores de las posteriores técnicas moleculares. La detección cualitativa se realizó mediante RT-PCR e hibridación Southem-blot, la cual nos permitía detectar 20 moléculas de dsRNA/ml. Para la cuantifícación molecular se empleó la RT-PCR a tiempo real utilizando SYBR Green. No obstante, para la cuantifícación absoluta fue necesario construir un dsRNA patrón. Dicha metodología se aplicó en muestras de agua residual recogidas mensualmente del área urbana de Barcelona desde junio de 1998 hasta enero de 2003. Los resultados mostraron que rotavirus es el virus entérico RNA más abundante, y que existe mayor concentración durante el período comprendido entre noviembre y abril. Estos datos correlacionan con la estacionalidad existente en el número de casos clínicos declarados durante el mismo período de estudio. Dado que el análisis del agua residual nos ofrecía una buena correlación con la incidencia clínica de rotavirus, utilizamos dicha muestra para el estudio epidemiológico de las cepas circulantes. Para ello caracterizamos el G-tipo y P-tipo de la mayoría de muestras de agua residual en las que previamente se había diagnosticado rotavirus. Las principales cepas circulantes durante el período de estudio fueron G1P[8], G1P[4] y G3P[8]. Asimismo, se observó una parecida frecuencia de cepas consideradas comunes como de cepas consideradas raras. Así pues, el agua residual urbana puede ser una herramienta útil para conocer qué cepas de rotavirus se encuentran circulando por la población humana, ofreciendo información muy valiosa para el diseño de vacunas.