Sistema de secreción de tipo III en "Aeromonas" mesófilas

Resumen

Aeromonas hydrophila es un bacilo gram-negativo, patógeno oportunista de animales y humanos. La patogénesis de A. hydrophila es multifactorial. Con objeto de identificar genes implicados en la virulencia de la cepa PPD134/91 de A. hydrophila, se realizaron experimentos de sustracción génica, que llevaron a la detección de 22 fragmentos de ADN que codificaban 19 putativos factores de virulencia, incluyendo un gen que codificaba una proteína de sistema de secreción de tipo III (T3SS). La creciente importancia del T3SS en la patogénesis de diversas bacterias, llevó a identificar y analizar la agrupación génica del T3SS de las cepas AH-1 y AH-3 de A. hydrophila, así como también el efector AexT en la cepa AH-3. La inactivación de los genes de T3SS aopB y aopD en A. hydrophila AH-1, y ascV en A. hydrophila AH-3 conlleva una disminución de la citotoxicidad, un incremento de la fagocitosis, y una reducción de la virulencia en diferentes modelos animales, demostrando estos resultados que el T3SS es necesario para la patogenicidad del género Aeromonas. El mutante en el gen aexT de la cepa AH-3 de A. hydrophila muestra una ligera reducción de la virulencia, ensayada con diferentes métodos. Por otro lado, la proteína AexT presentó actividad ADP-ribosiltransferasa, y se demostró su translocación vía T3SS al interior de células eucariotas, sistema que a su vez parece ser inducible in vitro en condiciones de depleción de calcio. Mediante el uso de diferentes sondas de ADN, se determinó la presencia del T3SS en cepas tanto clínicas como ambientales de diferentes especies del género Aeromonas: A. hydrophila, A. veronii, y A. caviae, y la codistribución de esta agrupación génica y del gen aexT. Finalmente, con el fin de analizar la activación transcripcional de la agrupación génica de T3SS y del efector AexT en A. hydrophila AH-3, los promotores predichos del operón aopN-aopD y el gen aexT se fusionaron con el gen reporter gfp (Green Fluorescence Protein). Además, se demostró que la expresión de ambos promotores depende de diferentes componentes bacterianos, como por ejemplo el sistema de dos componentes PhoP/PhoQ, el sistema de quórum sensing AhyI/AhyR, el sistema flagelar, el lipopolisacárido, la oxidoreductasa DsbA o el complejo enzimático piruvato deshidrogenasa.