Cerca i identificació de nous biomarcadors de fibrosis hepàtica per mitjà de tècniques proteòmiques

Resumo

La detección precoz de flbrosis hepática es dagran relevancia para el diagnóstico y el tratamiento de los pacientes con una enfermedad hepática crónica. En la actualidad, se utilizan varios procedimientos para su estadificaclón. Sin embargo, estos métodos pueden conllevar complicaciones clínicas y/o presentar incertidumbre diagnóstica principalmente en las primeras etapas de la enfermedad. En este contexto, el primer estudio de ta presente tesis doctoral fue diseñado para revelar nuevos biomarcadores no Invasivos de fibrosis hepática en un modelo in vivo de inducción a fibrosis y cirrosis mediante la Inhalación crónica de CC14. Se analizaron 94 muestras de suero de ratas Wlstar adultas con diferentes grados de fibrosis hepática y 36 ratas control. En primer lugar, las muestras de suero procedentes de 18 ratas tratadas con CCl4 se agruparon en tres conjuntos diferentes en función de la gravedad del daño hepático y el proteoma sérico se identificó mediante cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de masas en tándem y libre de marcaje (label-free LC-MS/MS). Además, se analizaron tres muestras de suero obtenidas de la combinación de 16 ratas Wistar control. En base a los datos proteómicos obtenidos, se realizó un análisis multlvariante que mostró tres principales vías de señallzae::lón celular alteradas en la fibrosls. En estadios cirróticos, se detectaron más desequilibrios biológicos, así como alteraciones multiorgánicas. De las múltiples proteínas alterades, se seleccionaron la hemopexlna y S1PA1L1 (signal-lnduced prollferation-associated 1-like 1) como potenciales marcadores séricos de fibrogénesis hepática. Los resultados fueron validados por ELISA en un grupo Independiente de 76 ratas fibróticas/cirrótlcas y 20 controles, que confirmaron SIPAlLl como un potencial biomarcador no invasivo de fibrosis hepática. En concreto, S1PA1U mostró una clara disminución en las muestras de suero de ratas flbróticas y cirróticas, así como una gran precisión para Identificar estadios tempranos de la enfermedad. En conclusión, el anállsis proteómico de muestras sérlcas de ratas tratadas con CC14 ha permitido la identificación de S1PA1L1 como un marcador no Invasivo de fibrosis hepática temprana. El segundo estudio se diseñó para identificar nuevos blomarcadores no Invasivos de fibrosls hepática, en un contexto clínico donde el proceso fibrogénico se produce de forma más acelerada: en pacientes con VHC positivo y que se sometieron a trasplante de hígado (LT). En concreto, se analizaron muestras séricas de 93 pacientes LT con recidiva del VHC, 41 pacientes flbróticos de distintas etiologías no trasplantados y con un estadio fibrótlco F;;>;l y, como grupo control, 9 pacientes sin recurrencia del VHC que recibieron tratamiento antíviral antes del LT. Finalmente, también se analizó la sangre obtenida de 16 sujetos sanos. Las muestras de suero fueron fraccionadas por eromatografía de Intercambio iónlco y su perfil proteómico se analizó por SELDI-TOF¬MS. La separación del péptido de interés se realizó por cromatografía de Intercambio lónico y electroforesis en gel, seguida de la Identificación por espectrometría de masas en tándem. Se observaron diferencias marcadas entre el perfil proteico sérico de los pacientes LT que presentaron recurrencla temprana de fibrosis y los no recurrentes (grupo control). De todas ellas, la elevada intensidad que presentaba el pico proteico de m/z 5.905 fue la característica más distintiva de los pacientes LT no recurrentes. Sin embargo, el mismo pico apenas se detectó en pacientes LT recurrentes. Estas diferencias también se observaron al comparar muestras sérlcas de sujetos sanos con muestras de pacientes flbrótlcos no trasplantados, lo que indica que los resultados obtenidos no estaban relacionados con la infección del VHC o el trasplante hepático