Papel de la citómica funcional en el estudio de mecanismos de refractariedad de las neoplasias hematológicas

Resum

La leucemia aguda y el mieloma múltiple son neoplasias hematológicas con una incidencia notable en la población y una elevada mortalidad. Una de las principales causas de la mortalidad es la refractariedad al tratamiento y la recaída. A pesar de los grandes avances terapéuticos, la mayoría de pacientes experimenta recaídas o refractariedad, haciendo que estas enfermedades sean incurables. La citómica funcional es una disciplina que permite el análisis multiparamétrico de la heterogeneidad celular y de los citomas, relacionando la genómica y la proteómica con la dinámica y función celular. Esta tecnología podría ser clave para detectar células relacionadas con la refractariedad, permitiendo la manipulación mínima de los especímenes de estudio, así como la mimetización de las condiciones fisiológicas. Todo ello puede contribuir a detectar eficientemente dichas células y a desarrollar nuevas aproximaciones para el estudio de las implicaciones pronósticas y de la predicción de riesgo de recaída o enfermedad refractaria. El objetivo de la Tesis Doctoral residió en desarrollar nuevos sistemas alternativos para estudiar e identificar poblaciones celulares refractarias, aplicando aproximaciones citómicas avanzadas que permitían realizar estudios a nivel fenotípico y funcional, con una perturbación mínima del espécimen. En el primer trabajo se desarrolló una tecnología basada en citómica funcional para determinar la actividad fosfatasa alcalina en subpoblaciones de células madre de la leucemia aguda evaluándose como método potencial para detectar subpoblaciones refractarias. En los pacientes diagnosticados de leucemia aguda refractaria, se determinaron poblaciones CD34+/ALPhigh en distintos seguimientos que podrían estar asociadas con la leucemogénesis a lo largo del tiempo. Para explorar la significancia de la actividad fosfatasa alcalina celular en el momento del diagnóstico de leucemia mieloide aguda, se realizó un estudio prospectivo en 43 pacientes. Se demostró que la detección de la actividad fosfatasa alcalina se mostraba como un factor pronóstico independiente de supervivencia libre de eventos, pudiendo ser incluida en la estratificación de riesgo actual de la enfermedad. En segundo trabajo, mediante la utilización de la citómica funcional, se trató de diseñar y evaluar una nueva metodología para identificar las células supresoras de origen mieloide con expresión de PD-L1 en pacientes con mieloma múltiple, con el objetivo predecir el éxito de la inmunoterapia con inhibidores de PD-L1. La clave de la metodología desarrollada residió en la utilización de células vivas y en el propósito de mimetizar las condiciones fisiológicas, para tratar de comprender los mecanismos de regulación del ligando. La combinación de la detección inmunofenotípica de PD-L1 con la estimulación celular reveló diferencias en la reactividad de la molécula en los 35 pacientes estudiados. Las diferencias observadas, sugirieron una gran plasticidad estérica de la molécula que podría contribuir a explicar la gran heterogeneidad en el grado de respuesta a la inmunoterapia. En conclusión, gracias a los trabajos desarrollados en la Tesis Doctoral se han aportado nuevas evidencias de la importancia de la citómica funcional en el estudio de la neoplasia hematológica, proporcionando abordajes complementarios a las tecnologías actuales en la comprensión de la evolución de la enfermedad.