Caracterización de los miembros herc1 y herc3 de la familia herc, relacionada con las e3 ubiquitina-proteína ligasas hect y el factor intercambiador de nucleótidos de guanina rcc1. Implicáciones en endocitosis y procesos dependientes de ubiquitina

Resumen

La familia de proteínas HERC se caracteriza por la presencia de un dominio HECT, común a la subclase HECT de E3 ubiquitina-proteína ligasas, y uno o más dominios RLD, relacionado con el intercambiador de nucleótidos de guanina RCC1. La familia HERC consta de cuatro miembros en humanos. El primero, HERC1, está codificado por un gen que fue aislado durante la búsqueda de nuevos oncogenes. Durante el estudio de su posible actividad intercambiadora de nucleótidos de guanina se demostró una doble relación con el tráfico intracelular: por una parte, su dominio RLD1 es capaz de estimular la disociación de nucleótidos de guanina para GTPasas de la Superfamilia Ras implicadas en el tráfico vesicular (ARF1 y ciertas proteínas Rab); por otra parte, su dominio RLD2 puede interaccionar con las proteínas ARF1 y clatrina, una proteína de cubierta vesicular. En este trabajo se ha analizado la relación entre HERC1 y la endocitosis. Se ha comprobado la presencia de HERC1 en endosomas y la capacidad del dominio RLD1 de estimular la disociación de nucleótidos de guanina para ARF6, implicada en la endocitosis. Estos resultados sugieren un posible papel de HERC1 en la endocitosis a través de la regulación de ARF6. La proteína HERC3, de la cual no se disponía de ninguna información al iniciarse esta tesis doctoral, es el producto hipotético de una secuencia codificante que fue aislada mediante un procedimiento destinado a la búsqueda al azar de nuevos ADNc. En este estudio se han generado anticuerpos específicos contra los dominios RLD y HECT de HERC3 que han permitido comprobar una amplia expresión de esta proteína en distintos tipos celulares y tejidos. HERC3 se localiza mayoritariamente en citosol, aunque una pequeña proporción está asociada a membranas intracelulares, donde colocaliza con las proteínas vesiculares beta-COP, Rab5 y ARF. En los estudios realizados no s e ha podido detectar actividad intercambiadora de nucl