Terapia combinada (alopurinol+dantroleno) como propuesta para la mejora de la lesion por isquemia y reperfusion en el trasplante de organos

Resumen

La lesión por Isquemia y Reperfusión (I/R) es la consecuencia de un proceso fisiopatológico considerado una de las principales causas que pueden llevar al fracaso de un trasplante por reducción del flujo sanguíneo en la fase de Isquemia (explante y preservación del órgano) y una revascularización en el implante (Reperfusión). A pesar de los avances terapéuticos actuales, los procesos patológicos del tracto intestinal, como el tromboembolismo mesentérico, evolucionan con una elevada tasa de mortalidad (95%). No se ha encontrado hasta el momento un protocolo concluyente para la prevención y el tratamiento de las lesiones por I/R; sin embargo, teniendo en cuenta que separadamente Alopurinol y Dantroleno presentan efectos positivos en estos casos, se propone el estudio de un Tratamiento Farmacológico Combinado para combatir el daño isquémico intestinal. Hemos diseñado el estudio utilizando un modelo de I/R intestinal en rata, para comparar los efectos de Alopurinol, Dantroleno y Terapia Combinada. En el trabajo se han empleado 90 animales divididos en 15 grupos experimentales: un grupo sham (laparotomía sin Isquemia), dos grupos I/R (60 min de Isquemia + 3 ó 24h de Reperfusión) y 12 grupos tratados con Alopurinol, Dantroleno o Terapia Combinada en diversas situaciones (Pre y Post-tratamiento a 3 y 24h de Reperfusión). El grado de daño intestinal se estudió evaluando la peroxidación lipídica (MDA), actividad enzimática antioxidante (Superóxido Dismutasa, Catalasa, Glutatión Peroxidasa) así como marcadores inflamatorios (Interleuquina 10, Factor de necrosis tumoral alfa). Adicionalmente se cuantificaron las lesiones tisulares con Histopatología e Inmunohistoquimia. La Terapia Combinada resultó ser la mejor opción para minimizar la peroxidación lipídica inducida por la Isquemia manteniendo un metabolismo celular aceptable de la mucosa intestinal. Los niveles enzimáticos se mostraron normales en los parámetros estudiados observándose que los grupos tratados con esta combinación mostraron diferencias significativas (p < 0,05) frente a los grupos I/R. A nivel histológico e Inmunohistoquímico las lesiones de la mucosa intestinal fueron menos severas en los animales tratados con Terapia Combinada a 24h de Reperfusión en comparación con el grupo I/R, evidenciando una menor lesión de las criptas mucosas. La Terapia Combinada disminuyó el grado de peroxidación lipídica, reguló la respuesta de los sistemas antioxidantes intracelulares y atenuó los cambios morfológicos de la mucosa intestinal inducidos por la Isquemia mesentérica. SUMMARY The Ischemia and Reperfusion (I/R) injury is the consequence of a pathophysiological process considered one of the main causes that can lead to the failure of a transplantation due to reduction of blood flow in the Ischemia phase (organ explant and preservation) and a revascularization in the implant (Reperfusion). In spite of current therapeutic advances, pathological processes of the intestinal tract, such as mesenteric thromboembolism, evolve with a high mortality rate (95%). A conclusive protocol for the prevention and treatment of I/R injuries has not been found so far; however, considering that Allopurinol and Dantrolene separately have positive effects in these cases, the study of a Combined Pharmacological Treatment to combat intestinal ischemic damage is proposed. We designed the study using a rat intestinal I/R model to compare the effects of Allopurinol, Dantrolene and Combination Therapy. In the study, 90 animals were divided into 15 experimental groups: a sham group (laparotomy without Ischemia), two I/R groups (60 min of Ischemia + 3 or 24 hours of Reperfusion) and 12 groups treated with Allopurinol, Dantrolene or Therapy Combined in different situations (Pre and Post-treatment at 3 and 24h of Reperfusion). The grade of intestinal damage was studied by evaluating lipid peroxidation (MDA), antioxidant enzyme activity (Superoxide Dismutase, Catalase, Glutathione Peroxidase) as well as inflammatory markers (Interleukin 10, Tumor necrosis factor alpha). Additionally, tissue lesions were quantified with Histopathology and Immunohistochemistry. Combination Therapy proved to be the best option to minimize lipid peroxidation induced by Ischemia because an acceptable cellular metabolism of the intestinal mucosa is maintained. Enzymatic levels were normal in the studied parameters and the groups treated with this combination showed significant differences (p < 0.05) compared to the I/R groups. Histological and Immunohistochemically lesions of the intestinal mucosa were less severe in the animals treated with Combination Therapy at 24h of Reperfusion compared to the I/R group, therefore it shows a lower injury of the mucous crypts. Combination Therapy decreased the grade of lipid peroxidation, regulated the response of intracellular antioxidant systems and attenuated the morphological changes of the intestinal mucosa induced by mesenteric Ischemia.