Quimerismo en pez cebraun modelo en biotecnología animal

Resumen

El objetivo del presente trabajo se ha centrado en el estudio de los parámetros que favorecen la mejora de las eficacias técnicas del quimerismo, tales como la temperatura del medio, la dosis de radiación ultravioleta (UV) y la osmolaridad del medio. Para determinar la temperatura que retarda o paraliza el desarrollo embrionario y el tiempo que los mismos pueden resistir, fueron realizados dos ensayos preliminares, donde se ha determinada la temperatura de 16ºC como la que paraliza el desarrollo embrionario y el tiempo que éstos soportan sin comprometer su posterior reanudación del desarollo. Cuando sometido en dicha temperatura embriones en estadio MBT-temprano en el que habitualmente se practica el quimerismo, durante 0 (control), 1, 2, 3 h. Las mejores tasas de supervivencia fueron observadas hasta las 2h. En el siguiente experimento, se estudió el efecto de la osmolaridad del medio de manipulación sobre la supervivencia embrionaria y la viabilidad de las células donantes. Para lo cual se inyectaron aproximadamente 0.1- 0.15µl de medio salino Hanks sin Ca++ ni Mg++ (Sigma - H9394: 300 mOsm) y posteriormente incubados. La supervivencia a 24h fue significativamente mayor en el medio H10 que en el HS (H10:81% vs HS:68% p<0.05), habiendo cambiado dicho resultado a los 5 días donde la supervivencia embrionaria del grupo HS ha sido ligeramente mayor (HS:78% vs H10:69%). Las diferencias en las tasas de supervivencia celular fueron establecidas entre vivas vs intactas mediante tinción con "trypan blue" después de manipuladas con pipetas de calibres 40 - 50 µm o 60 - 70 µm. Los resultados sugieren que el efecto detectado sobre las células (vivas vs intactas) no fue ejercido por la osmolaridad del medio de manipulación con la que ellas contactaron sino por el calibre de la pipeta, en favor a las de 60 - 70 µm (p<0.05). En el tercer experimento, se definió la dosis óptima de radiación UV con la que penalizar los embriones receptores en estadio MBT para reducir la partici