Hemicloning technology in the rabbit

Abstract

La criopreservación de la información genética procedente exclusivamente de las hembras de mamífero es de notable interés en diversas áreas: reproducción aistida, mejora genetica y selección, así como en la conservación de la biodiversidad. De entre las posibles estrategias teóricas para lograr esto: criopreservación de oocitos o de céluas somáticas, la criopreservación de embriones partenognotas fue puesta a punto y evaluada favorablemente para conejo, por cuanto se obtuvo descendencia viables a apartir de partenogenota. Brevemente,la tecnología de hemiclonación supone la obtención de un embrión partenogenota haplide a partir de la activación artificial de un oocito MII, su cripreservación y su posterior combinación en un ambiente cigótico pre-activado que únicamente conserva el por núcleo macho. Por esta metodología, queda reconstituida la dotación diploide heteroparental, imprescindible para obtener descendencia a partir de tales partenogenotas. Para la obtención de descendencia viable sólo resta la transferencia de los diploides así reconstituidos a hembras receptoras por la técnica de transferencia de embriones. En esta tesis se logró obtener por primera vez, en una especie diferente a ratón, embriones preimplantatorios partenogenotas haploides. El desarrollo partenogenota haploide obtenido a 32 horas de cultivo, alcanzó el estadio de mórula de 32 células (20% por oocito recuperado). Tales embriones fueron individualmente criopreservados por un procedimiento de equilibrio. Su descongelación y posterior desagregación por un proceso químico, permitió contabilizar el número real de células haplides donantes disponibles por embrión partenogenota desagregado (32,5). Empleando un 25% de las mismas, se reconstruyó la dotación diploide hetroparental por transplante nuclear según la metodología antes descrita. Los embriones deiplides reconstituidos se desarrollaron in vitro con nivele