Evaluación de la calida proteica de alimentos y su impacto en los niveles plasmáticos en humanos por cromatografía líquida en alta eficacia (clae)

Resum

Se describe un método de cromatografía líquida de fase reversa para la separación de 17 feniltiocarbamil derivados de aminoácidos en plasma humano en unos 20 minutos. En este método usamos derivatización precolumna con fenilisotiocianato (PITC) y posterior separación en una columna PicoTag C18 (300 x 3.9 mm, 3 um) termocontrolada a 38ºC, un gradiente lineal de multietapas para dos solventes y detección U.V a 254 nm. El solvente A tenía acetato de Sodio 0.150 M (pH 6.40) y acetonitrilo (94:6 v/v) y el solvente B era agua-acetonitrilo (40:60 v/v). Se realizó un método que fuera simple y adecuado para la validación de las condiciones de separación de los 17 derivados de aminoácidos. El método fue validado para determinar exactitud (porcentaje de recuperación promedio de 90%), precisión (coeficiente de variación promedio menor del 5%), linealidad (coeficiente de correlación r=0,996 en promedio) y con límites de detección y cuantificación desde 0,46 y 1,54 uM para Cisteína (Cys) hasta 1,42 y 4,57 uM en Leucina (Leu) respectivamente. Una vez desarrollada la técnica se procedió a determinar niveles plasmáticos de aminoácidos libres teniendo en cuenta que la concentración de éstos en los tejidos y en los fluidos del cuerpo están influenciados por los constituyentes dietéticos. Pare este propósito se realizó un estuido que involucraba nueve adultos jóvenes sanos (5 hombres y 4 mujeres) los cuales fueron sometidos a la ingesta de tres tipos diferentes de dieta bajo las condiciones normales de consumo de Colombia: tortilla de maíz normal (TMN), tortilla de maíz con queso (TMQ) y huevo cocido (HC), al cabo de 2 horas de haber consumido las dietas se les determinó los niveles plasmáticos de aminoácidos utilizando la técnica de CLAE y posteriormente por métodos clínicos convencionales los niveles séricos de glicemia, niveles de colesterol, colesterol-HDL y triglicéridos, así como también los niveles séricos de proteínas to