Desarrollo de una metodología analítica basada en la inyección en flujo continuo para la determinación de actividades amilolíticas

Abstract

El 2,6-TNS es un compuesto apenas fluorescente en agua pero cuya fluorescencia puede ser fuertemente incrementada si su entorno deviene hidrofóbico, como ocurre en presencia de a-(1,4)-D-glucanos, con los que forma un complejo fluorescente. La intensidad de fluorescencia de este complejo depende de la concentración másica del substrato de manera lineal, para AMW constante, y depende del AMW de manera no lineal, tomando la forma de una curva creciente que comienza en un DP de 6 y alcanza un valor constante para un DP de 300 en adelante. Durante la despolimerización de los a-glucanos con enzimas amilolíticos se produce una disminución de su concentración másica, de su AMW o de ambos que se refleja en el sistema FIA en una disminución de la señal fluorescente. Esto ha permitido desarrollar una metodología 2,6-TNS/FIA para la determinación de actividades amilolíticas basándonos en la formación del complejo fluorescente y su dependencia respecto al AMW y la concentración másica de substrato. Con esta metodología se han determinado las cinéticas de despolimerización de amilosa, amilopectina, almidón soluble y maltodextrinas por dos exo-enzimas: la b-amilasa de cebada y la glucoamilasa de Aspergillus niger y un endo-enzima, la a-amilasa de Aspergillus oryzae, así como la determinación de esta actividades enzimáticas empleando estos substratos.