Análisis del impacto de los factores genéticos y metabólicos en la tasa de respuesta viral sostenida en pacientes con hepatitis crónica c tratados con Interferón Pegilado y Ribavirina

Resumen

INTRODUCCIÓN La presencia de resistencia a la insulina se asocia con una menor tasa de respuesta viral sostenida en pacientes con hepatitis crónica C. Los microRNAs (miRNA) son pequeñas moléculas de RNA que regulan la expresión génica. La desregulación de los miRNAs puede jugar un papel clave en muchas enfermedades hepáticas como la hepatitis crónica C o el hepatocarcinoma. Miravirsen, el primer agente antimiRNA122 ha mostrado actividad antiviral en pacientes con hepatitis C. OBJETIVOS: Determinar si la resistencia la insulina (IR) predice la respuesta virológica sostenida (RVS), independientemente del polimorfismo de la IL28B en una cohorte de pacientes con hepatitis C crónica tratados con peginterferón (PegIFN) más ribavirina (RBV). Analizar las diferencias de expresión de los miRNA más abundantes en células humanas, empleando un sistema in vitro en la línea celular Huh7.5 derivada de hepatoblastoma humano, infectado con el replicón JFH1 del virus de la hepatitis C. MÉTODOS Se determino el genotipo de la rs12979860 IL28B en una cohorte de 240 pacientes españoles con antiHCV y HCVRNA positivos tratados con terapia estándar. La resistencia a la insulina fue calculada con la formula [HOMA-IR= Insulina (IU/ml) * glucosa (mmol/L) / 22.5]. A todos los pacientes se les determino el genotipo (Innolipa), la carga viral (Taqman) y se utilizo la escala METAVIR para valorar el grado de fibrosis histológico. Los distintos factores predictivos de RVS se analizaron estadísticamente mediante una regresión binaria logística. La línea celular Huh7.5 se cultivó en medio DMEM suplementado con FBS al 10%, antibióticos, L-Glutamina y aminoácidos no esenciales. Las células se incubaron a 37ºC, y 5% de CO2. Las partículas infectivas de JFH-1 se añadieron a las células en una proporción de una partícula/célula. Las células transfectadas se incubaron durante 48 horas y después se extrajo el RNA total con TriSure (Bioline, London, UK). Mediante el Kit RT2 miRNA PCR Array System (SABiosciences-Qiagen) se realizó la cuantificación de los 88 miRNAs más expresados siguiendo las instrucciones del fabricante. RESULTADOS En una cohorte de 240 pacientes [78% genotipo 1, 24% fibrosis avanzada, 71% carga viral alta (¿800.000 IU/mL), 31% IL28b genotipo CC y 50% con HOMA-IR>2] tratados con PegIFN y RBV, 126 de los 240 (53%) alcanzaron RVS. El análisis univariante de las diferentes factores determinó que el genotipo viral (genotipo 1/4: 49,3% vs genotipo 2/3: 72,7%; p=0,009), grado de fibrosis (F0-F1: 53,0% vs. F2: 28,0% vs. F3-F4: 19,0%; p=0,001), la presencia de esteatosis (presencia: 32,6% vs. ausencia: 67,4%; p=0,001), el índice HOMA-IR (HOMA-IR<2 60,3% vs. HOMAIR> 2: 39,7%; p=0,001) y el genotipo de la IL28B (genotipo CC: 60,3% vs. genotipo CT/TT: 39,7%; p=0,001) están asociados significativamente con la RVS. En el análisis multivariante mediante regresión logística binaria las variables independientes fueron: genotipo viral OR: 0,21 (95%CI: 0,07-0,67), p =0,007; fibrosis OR: 2,27 (95%CI: 1,33- 3,87), p=0,003; esteatosis OR: 0,31 (95%CI: 1,33-3,87), p=0,012, HOMA-IR OR: 0,37 (95%CI: 0,17-0,81), p=0,012; y el genotipo de la IL28B OR: 0,32 (95%CI: 0,14-0,72), p=0,006. El análisis univariante confirma la importancia del genotipo viral, la fibrosis, la esteatosis, la resistencia a la insulina junto a los polimorfismos de la IL28B como factores predictivos de RVS. La posibilidad de alcanzar RVS fue significativamente mayor en pacientes con fibrosis leve, sin esteatosis, HOMA-IR<2, respuesta viral rápida, genotipo viral 2&3 así como el polimorfismo favorable de la IL28B. Encontramos que la IL28B predice la RVS en pacientes difíciles de curar, es decir, pacientes con genotipo 1 o 4, fibrosis avanzada, esteatosis y HOMA-IR>2. No se observaron diferencias significativas entre el índice HOMA-IR y los diferentes genotipos de la IL28B. De los 88 miRNA estudiados, 8 miRNA están sobre-expresados (inducidos) más de 4 veces en células infectadas con respecto a células control (no infectadas): miRNA29a (4,1±0,3), miRNA29b (4,7±0,2), miRNA22 (4,4±0,24), miRNA32 (6,8±0,4), miRNA130a (6,5±0,45), miRNA141 (7,5±0,4), miRNA186 (4±0,5), miRNA181b (4,3±0,36). Los microARNs 29a y 29b están implicados en el desarrollo de resistencia a la insulina e inhiben la apoptosis; el miRNA 130a activa la adipogénesis y se relaciona con el acúmulo de grasa en los hepatocitos y el desarrollo de cáncer de hígado. El miRNA122 está expresado a niveles elevados en la línea celular Huh7.5, no registrándose ningún cambio en presencia del virus. CONCLUSIÓN Nuestros resultados indican que la Resistencia a la insulina predice la respuesta viral sostenida independiente del genotipo de la IL28b. La fibrosis, la viremia y la resistencia a la insulina no están a asociadas con el polimorfismo rs12979860 de la IL28b. La infección por el virus de la hepatitis C modifica la expresión de los miRNA 29a, 29b (inducen resistencia a la insulina) y 130a (promueve esteatosis). Conocer mejor los mecanismos implicados en esta desregulación supondría el desarrollo de nuevas estrategias diagnósticas y terapéuticas para el tratamiento de las enfermedades hepáticas.