Isolation and characterization of extracellular vesicles in Candida albicans

  1. Virginia Pérez-Doñate 1
  2. Facundo Pérez-Giménez 1
  3. Lucas del Castillo Agudo 1
  4. Juan Alberto Castillo-Garit 1
  5. Mar Soria-Merino 2
  6. Eulogio Valentín Gómez 1
  1. 1 Universitat de València
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  2. 2 Hospital Clinico Universitario de Valencia
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Revista:
Nereis: revista iberoamericana interdisciplinar de métodos, modelización y simulación

ISSN: 1888-8550

Año de publicación: 2020

Número: 12

Páginas: 99-108

Tipo: Artículo

DOI: 10.46583/NEREIS_2020.12.611 DIALNET GOOGLE SCHOLAR lock_openDialnet editor

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Resumen

Contexto: La aparición de infecciones sistémicas por C. albicans ha aumentado sobre todo en pacientes graves. En las infecciones fúngicas, los mecanismos de secreción son eventos clave para que el establecimiento de la enfermedad. Hallazgos recientes demuestran que los organismos fúngicos liberan muchos componentes moleculares al espacio extracelular en vesículas extracelulares. Objetivos: Desarrollamos un método para obtener exosomas de cultivos de levadura de Candida albicans. Métodos: Las cepas de levadura que se usaron en este trabajo son C. albicans SC5314, C. parapsilosis (ATCC 22019) y C. krusei (ATCC 6258). Las levaduras se cultivaron a 37.º C en un medio YPD líquido. Los cultivos de células fueron centrifugados y el sobrenadante, filtrado por medio de nitrocelulosa estéril. Los filtrados se concentraron y centrifugaron usando una ultracentrifugadora. El sedimento fue analizado por un microscopio electrónico de transmisión. Resultados: La microscopía electrónica de transmisión y el análisis de nanopartículas confirman la presencia de vesículas extracelulares (exosomas) de un tamaño entre 100 y 200 nm, así como la ausencia de contaminantes celulares. Esto se ratificó mediante la caracterización de proteínas obtenidas por medio de la técnica de Western blot, donde se evaluó la ausencia de contaminación celular en las preparaciones. Conclusiones: El método es altamente eficaz dada la homogeneidad y la pureza de las microvesículas obtenidas. El protocolo desarrollado en este artículo demuestra ser efectivo para obtener exosomas de otras especies Candida, lo que permitirá que en futuros estudios se determine su composición proteica y el papel que estas vesículas pueden desempeñar.

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Fuente de los datos: Dialnet