Mecanismo cinético de la L-Alanina Deshidrogenasa de Halobacterium salinarum
- Sahagún Casanova, Nuria
- Chiquinquirá Cadenas Caba Director
Defence university: Universitat d'Alacant / Universidad de Alicante
Fecha de defensa: 21 June 1999
- Francisco I. Llorca Alcaraz Chair
- María-José Bonete Secretary
- Ernesto Cortés Castell Committee member
- Concepción Abad Mazarío Committee member
- José Luis Vicedo Sáez Committee member
Type: Thesis
Abstract
Se ha estudiado el mecanismo cinético de la L-Ala DH (L-Alanina: NAD+- oxidorreductasa EC.1.4.1.1) de Halobacterium salinarum (Archaea halófilo extremo). Tras la purificación de la Ala DH, se buscaron las condiciones apropiadas para la realización de los ensayos de aminación y desaminación: tampón Tris-HC1 0,1 M, pH 9,0, con KCL 3,6 M y t =40 C. Se procedió a investigar el mecanismo cinético mediante los métodos de velocidades iniciales, inhibición por producto, inhibición por análogos estructurales de los productos y empleo de sustratos alternativos. Los resultados obtenidos son consistentes con un mecanismo secuencial ordenado en el que los sustratos se unen a la enzima en el siguiente orden: NADH, Pyr y NH4+, y los productos se liberan: L-Alanina y NAD+-. El mecanismo supone un sistema de estado estacionario pero con una etapa de equilibrio rápido en la unión del Pyr, que queda confirmada por el método de inhibición por producto al producirse un complejo abortivo ("dead-end").