Análisis comparativo de la proteina humana gtpbp3 y la proteina bacteriana mnme, dos proteínas g homólogas implicadas en la modificación de trnas

Resumen

El objetivo general de esta tesis está dentro de un proyecto de nuestro laboratorio que persigue la caracterización de GTPBP3, el gen humano homólogo de mnmE. Para ello se estudiaron las variedades de mRNAs maduros resultantes del ayuste alternativo del gen GTPBP3 propuestas previamente en la literatura. Las dos variantes encontradas difieren en la presencia o no del exon SA situado entre las motivos G3 y G4 del dominio G de GTPBP3 .Además, mediante PCR cuantitativa vimos que ambas isoformas existen en todos las tejidos analizados aunque su nivel de expresion es baja ya que GTPBP3 no pudo ser detectada por el anticuerpo anti-GTPBP3. Respecto alas características bioquímicas analizadas, la afinidad de GTPBP3, isoforma larga, par mGTP y GDP es muy similar a la mostrada par su proteina homologa bacteriana MnmE. Sin embargo, la isoforma corta (isoforma deleción) tiene una afinidad par el GDP 100 veces superior a la que presenta la isoforma inserción, mientras que su afinidad par el GTP es del mismo rango. Las dos isoformas de GTPBP3, al igual que su homologa bacteriana MnmE, san capaces de formar un mimético del estado de transicion can el GDP y el fluoruro de aluminio; sin embargo, ambas isoformas, contrariamente a lo que ocurre can MnmE, no pueden hidrolizar el GTP in vitro. GTPBP3 es además capaz de dimerizar, la que posiblemente le permita, coma se ha observado can su homologa bacteriana, crear el sitio de unión para un derivado del tetrahidrofolato que actuará como donador del grupo unicarbonado en la reacción de modificación de las tRNAs. Finalmente, se ha podido observar que la proteína GTPBP3 no es capaz de complementar mutantes mnmE bacterianos, posiblemente porque no es capaz de reconocer las tRNAs bacterianos y/o otros participantes en la reacción de modificación controlada por MnmE.