Efecto biológico de la fsh recombinante de codorniz en la inducción del ciclo ovárico en aves

Resumen

La reproducción ex situ es una de las medidas reconocidas por la comunidad científica y conservacionista para la conservación de especies amenazadas y su reintroducción en el medio natural. Sin embargo, la reproducción en cautividad de especies de aves amenazadas fracasa con frecuencia debido a la ausencia de estímulos ambientales asociada a la vida en cautividad. Esta circunstancia impide el desarrollo de los ciclos reproductivos fisiológicos en condiciones naturales y, por tanto, la obtención de progenie a partir de individuos valiosos desde el punto de vista de la diversidad genética y ecológica. De modo general y, en resumen, los estímulos ambientales, a través de un conjunto de eventos fisiológicos en el sistema nervioso central, desencadenan la liberación hipotalámica de la hormona liberadora de gonadotropinas (GnRH), que inducirá la síntesis y liberación de gonadotropinas (FSH y LH) en las células gonadotropas de la adenohipófisis. Tanto la FSH como la LH inducirán a nivel gonadal los cambios fisiológicos necesarios para la maduración de los gametos. La posibilidad de inducir farmacológicamente los ciclos reproductivos en aves podría resolver en gran medida las dificultades de la reproducción en cautividad en especies o individuos de alto valor ecológico. Por otra parte, la aportación de conocimiento a la fisiología reproductiva de las aves, y, concretamente, a los mecanismos hormonales que controlan estos procesos, sería relevante para la mejor comprensión tanto de los ciclos reproductivos en la naturaleza como para la aplicación de dicho conocimiento a la producción de aves y huevos para consumo humano. Los trabajos de esta tesis incluyeron la obtención de una FSH recombinante de codorniz en un sistema de expresión heterólogo de células de mamífero (CHO) y la purificación de LH a partir de adenohipófisis de pavo. Por tanto, el desarrollo de anticuerpos específicos para FSH recombinante de codorniz y FSH y LH hipofisarias de pavo, fue considerado una herramienta imprescindible para el seguimiento de estas hormonas en los procesos de laboratorio: expresión en el medio de cultivo o lisados celulares, purificación, concentración y diálisis. La producción de anticuerpos específicos contra las subunidades beta de FSH y LH permitió la identificación de la FSH recombinante de codorniz (ccrFSH) expresada en células de ovario de hámster chino (CHO) y la identificación y purificación de LH de pavo. En los ensayos biológicos in vitro realizados, ccrFSH indujo significativamente la secreción de progesterona en células de la granulosa de folículos F5. Sin embargo, no indujo la inducción de secreción de progesterona en células de la granulosa de folículos F1. Estos resultados demostraron la especificidad de acción de esta hormona. En los experimentos in vivo, la administración exclusiva de ccrFSH durante quince días en codornices prepúberes indujo de manera consistente el desarrollo de folículos de diámetro ≥ 1 mm. Sin embargo, este tratamiento no indujo el desarrollo folicular completo. La administración combinada de ccrFSH y LH o eCG sí indujo desarrollo folicular completo, la ovulación y la formación de huevos en codorniz. En estos experimentos se demostró la actividad biológica in vivo de ccrFSH y la necesidad de la actividad conjunta de FSH y LH en la inducción del ciclo en esta especie. La FSH recombinante de codorniz también fue eficaz, administrada junto a eCG, en la inducción del desarrollo y maduración folicular ovárica. La administración de extracto glicoproteico de adenohipófisis de pavo en los individuos con folículos ováricos maduros indujo la ovulación y la puesta de huevos. La inseminación artificial en estos individuos y la incubación de los huevos puestos resultaron en desarrollo embrionario y eclosión.El control del ciclo inducido se realizó mediante exploración ecográfica de la cavidad celómica y permitió el seguimiento del desarrollo folicular hasta la ovulación. La ecografía se mostró un método eficaz para el seguimiento del ciclo ovárico inducido. Estos resultados demuestran la eficacia de ccFSH en la inducción del ciclo ovárico en aves y la posibilidad de utilizar esta tecnología en los procesos de reproducción asistida en especies amenazadas para la obtención de progenie y su reintroducción en el medio natural.