Caracterizacion de un analogo fluorescente del peptido citolitico melitina obtenido por modificacion quimica

Abstract

EL PEPTIDO CITOLITICO MELITINA HA SIDO MODIFICADO QUIMICAMENTE CON LA SONDA FLUORESCENTE DNC MEDIANTE LA REACCION DE LA TGASA OBTENIENDOSE UN DERIVADO FLUORESCENTE DE ESTIQUIOMETRIA 1:1 CON LA SONDA UNIDA EN EL RESIDUO GLN25. LA PUESTA A PUNTO DE METODOS CROMATOGRAFICOS HA PERMITIDO EL ANALISIS CUANTITATIVO DE LA REACCION, ASI COMO LA DESCRIPCION DE CONDICIONES PARA LA PURIFICACION DEL PEPTIDO MODIFICADO. LA CARACTERIZACION DEL COMPORTAMIENTO EN DISOLUCION PONE DE MANIFIESTO UN PARALELISMO CONFORMACIONAL ENTRE EL PEPTIDO NATIVO Y MODIFICADO. CON DIFERENTES MEMBRANAS MODELO SE HA OBSERVADO UNA ANALOGIA ENTRE MELITINA NATIVA Y MODIFICADA EN LO QUE RESPECTA AL GRADO DE ESTRUCTURACION, AFINIDAD POR EL LIPIDO, POLARIDAD DEL ENTORNO DEL TRIPTOFONA Y CARGA EFECTIVA DEL PEPTIDO. LA DNC-MELITINA RETIENE LA CAPACIDAD DE LISIS DE ERITROCITOS, EN ESTAS MEMBRANAS EL PEPTIDOSE LOCALIZA EN UN ENTORNO DE POLARIDAD MAS SEMEJANTE AL OBSERVADO PARA MEMBRANA MODELO DE PS O DPPC EN ESTADO GEL QUE AL DE MEMBRANAS DE EPC. POR OTRA PARTE, RESULTADOS DE TRANSFERENCIA DE ENERGIA PARECEN INDICAR QUE NO EXISTE UNA INTERACCION ESPECIFICA DE LA DNC-MELITINA CON PROTEINAS DE LA MEMBRANA DE ERITROCITO. FINALMENTE, LA SONDA UNIDA CONFIERE AL PEPTIDO UNA MAYOR SENSIBILIDAD Y UN MAYOR INTERVALO DE LONGITUDES DE ONDA PARA EL SEGUIMIENTO POR ESPECTROFLUORIMETRIA DE SU INTERACCION CON MEMBRANAS MODELO Y NATURALES, PERMITIENDO EN ESTE ULTIMO CASO DISTINGUIR EL PEPTIDO DE OTRAS PROTEINAS.