Regulacion del gen dnan de escherichia colilocalizacion y caracterizacion de promotores y terminadores

Resumen

EL GEN DNAN DE E.COLI CODIFICA LA SUBUNIDAD DE LA HOLOENZIMA DNA POLIMERASA III, ENZIMA RESPONSABLE DE LA SINTESIS REPLICATIVA DEL DNA EN ESTA BACTERIA. DICHO GEN SE SITUA EN EL MINUTO 83 DEL MAPA GENETICO DE E.COLI ENTRE LOS GENES DNAA Y RECF. EL OBJETIVO DE ESTA TESIS HA SIDO OBTENER UN MEJOR CONOCIMIENTO DE LOS ELEMENTOS QUE REGULAN LA EXPRESION DE ESTOS GENES. ASI, HACIENDO USO DE TECNICAS TALES COMO MAPEO DE MRNAS CON NUCLEASA S1, CLONACIONES EN EL VECTOR SONDA PKO-1, SECUENCIACION DE DNA, EXPERIMENTOS DE COMPLEMENTACION IN VIVO, FUSION DE PROTEINAS Y ENSAYOS ENZIMATICOS, HEMOS DEMOSTRADO QUE LOS GENES DNAN Y RECF CONSTITUYEN UNA UNIDAD TRANSCRIPCIONAL BAJO EL CONTROL DE LOS PROMOTORES DE DNAN, LOS CUALES SE ENCUENTRAN SITUADOS EN EL GEN DNAA. POR OTRA PARTE, HEMOS LOCALIZADO TRES TERMINADORES EN LA SEGUNDA MITAD DEL GEN DNAN. ESTOS TERMINADORES SON RESPONSABLES DE QUE EL 80% DE LA TRANSCRIPCION QUE SE INICIA EN LOS PROMOTORES DE RECF (SITUADOS EN MEDIO DEL GEN DNAN) QUEDE INTERRUMPIDA. CURIOSAMENTE, LOS TERMINADORES NO AFECTAN, EN CONDICIONES NORMALES, LA TRANSCRIPCION QUE SE INICIA EN LOS PROMOTORES DE DNAN. EN NUESTRO TRABAJO, HEMOS DEMOSTRADO QUE ESTO ES DEBIDO A QUE LA RNA POLIMERASA PUEDE SUPERAR LOS TERMINADORES LOCALIZADOS EN DNAN CUANDO EL PROCESO DE TRANSCRIPCION ESTA EXTRECHAMENTE COORDINADO CON EL DE TRADUCCION. EL CONJUNTO DE RESULTADOS LLEVAN A PROPONER QUE LOS GENES DNAA, DNAN Y RECF, FORMAN PARTE DE UN OPERON ATIPICO CONTROLADO POR LOS PROMOTORES DE DNAA EN EL QUE LOS GENES DISTALES POSEEN SU PROPIA REGION PROMOTORA. LOS ELEMENTOS REGULADORES IDENTIFICADOS EN ESTA TESIS (PROMOTORES Y TERMINADORES), PERMITEN LA EXPRESION NO COORDINADA DE LOS GENES QUE FORMAN PARTE DEL OPERON DNAA-DNAN-RECF.