Aplicaciones analiticas de las enzimas en medios no acuosos

Abstract

El objetivo de este trabajo es el desarrollar alternativas analíticas usando biosensores en medios no acuosos, basados en enzimas inmovilizadas no covalentemente a un soporte, se realizaron estudios sobre la aplicabilidad de la metodología propuesta en la determinación enzimática mediante FIA de peróxidos en aceites, de colesterol libre y total en grasas animales y de esteroles fecales en sedimentos. Los peróxidos se determinaron mediante un reactor de peroxidasa (HRP) inmovilizada no covalentemente sobre esferas de vidrio poroso de tamaño controlado de poro. El reactor estaba acoplado a un montaje FIA y conectado a un espectrofotómetro. Este resultó ser útil para la determinación de peróxidos en muestras de aceite de oliva, y mediante el uso de ecuaciones proporcionales se pudo determinar concentraciones de mezclas sintéticas de peróxido de hidrógeno y peróxido de terbutilo, y de peróxido de hidrógeno y peróxido de benzoilo, basandose en las diferencias de sensibilidad frente a la enzima. Los resultados de experimentos de recuperación de estas mezclas presentaron una precisión y una exactitud satisfactoria. EL COLESTEROL, libre se determinó en muestras de grasa animal (cerdo) y de aceite de hígado de bacalao, mediante un reactor bienzimático preparado con 1 mg de colesterol oxidasa (COD) y 1 mg de peroxidasa. El colesterol total se pudo determinar en extractos de grasa o aceite sometidos a un proceso de saponificación asistida por microondas. El método enzimático propuesto, así como el método de saponificación por microondas proporcionaron resultados precisos y comparables en exactitud al método de saponificación descrito por la A.O.A.C. El colestanol y el coprostanol fueron determinados experimentalmente, en tolueno, lo que indica el potencial empleo del reactor bienzimático de COD y HRP en el análisis de contaminación fecal de sedimentos y aguas. Mezclas sintéticas de colestanol y