Clonación y caracterización de genes que codifican para proteínas implicadas en la construcción de la pared celular fúngica

Resumo

La pared celular de Candida albicans esta formada basicamente por glucanos, manopreoteinas y quitina que se disponen formando una estructura tridimensional y dinamica. La quitina y B-glucanos forman el esqueleto rigido de la pared por lo que la quitina aunque es uno de los componentes minoritarios es fundamental para la insolubilización del resto de los componentes y por lo tanto la actividad quitinásica es basica para el crecimiento fungico. Durante el analisis de los productos obtenidos para la degradación controlada, con tripsina, de paredes celulares purificadas de C. Albicans previamente solubilizadas con SDS se aisló una proteína de 50 kDa que fue purificada y secuenciada. La secuencia amino terminal de la proteina de 50 kDa presentó un 100% de homología con la quitinasa 2 y un 92% con la quitinasa 3 de C.albicans. Para conocer la función biologica de estas quitinasas en C.albicans se realizó la delección de los genes CaCHT2 y CaCHT3 y debido a la elevada homologia que existe entre las quitinasas de C. Albicans con la quitinasa de S.cerevisiae se obtuvo también la cepa interrumpida en el gen ScCTS1 de S.cerevisiae. Así como las cepas sobreexpresantes del gen CaCHT2 tanto en C.albicans como en S. Cerevisae. Se estudio la expresión de los mensajeros de los genes CaCHT2 y ScCTS1 y se realizaron analisis fenotipicos de las cepas deleccionadas y sobreexpresantes de C.albicans y de S.cerevisiae así como analisis electroforeticos del material solubilizado por la tripsina de paredes celulares tanto de C.albicans como de S.cerevisiae asi como del material de diferentes fracciones subcelulares y de sobrenadante de medio de dichas cepas. Los resultados obrenidos sugieren que las enzimas que degraban los polimeros de la pared celular la quitinasa 2 y 3, están involucradas en los procesos morfogeneticos, además de la existencia de mecanismos compensatorios para un funcionamiento sincronizado de las enzimas invulucradas en la si