Marcadores bioquímicos de la activación plaquetaria; análisis multiparamétricos por citometría de flujo"

Abstract

La activación plaquetaria desempeña un papel fundamental en la fisiopatología de la hemostasia. Por esa razón, el estudio de marcadores bioquímicos tempranos de activación plaquetaria puede ser relevante para evaluar la activación de las plaquetas "in vivo" y las alteraciones de la reactividad asociadas a disfunciones de la hemostasia. El objetivo del trabajo consistió en desarrollar y valdiar métodos por citometría de flujo que permitan analizar en muestras de sangre humana entera, diversos eventos bioquímicos iniciales implicados en las respuestas plaquetaria. Para identificar la población plaquetaria se utilizó el anticuerpo monoclonal frente a laglicoproteina constitutiva GPIIb/Iia CD41 y se marcaron los eventos bioqúmicos confluorocrmos sensibles al calcio (Fluo-3), actina polimerizada (Faloidina-FITC), pH (BCECF), potencial de membrana plasmático (Bis-Oxonol), y exposiciónde fosfolípidos aniónicos (anexina-V-FITC). Los ensayos consisten en la medida de la variación de las fluorescencias específicas enla poblaciones seleccionada DC41(+) tras la adición de agonistas fuertes (Trombina) o débiles (ADP). Los datos muestran que los ensayos cinéticos por citometría de flujo implican un grado mínimo de manipulación y son útiles en el análisis de señales de activación plaquetaria, en la detección de plaquetas activadas circulantes y en el control de la terapia de la hemostasia.