Clonacion y caracterizacion del gen de candida albicans (cacyc3) que codifica para la enzima citocromo c hemo liasa

Resum

MEDIANTE INMUNORASTREO DE UNA GENOTECA DE CDNA EN EL VECTOR DE EXPRESION LAMBDA GT11 CON UN ANTICUERPO MONOCLONAL (MAB 4C12) QUE RECONOCE UN EPITOPO PRESENTE EN DOS ESPECIES MANOPROTEICAS DE 180 Y 260 KDA PRESENTES ESPECIFICAMENTE EN LA PARED CELULAR DE LA FORMA MICELIAL DEL HONGO, SE AISLARON DOS CDNAS IDENTICOS QUE CODIFICAN PARA EL EPITOPO RECONOCIDO POR MAB 4C12. EL EMPLEO DE ESTE CDNA COMO SONDA PERMITIO CLONAR EL GEN COMPLETO A PARTIR DE UNA LIBRERIA GENOMICA. DICHO GEN RESULTO CODIFICAR PARA LA ENZIMA MITOCONDRIAL CITOCROMO C HEMO LIASA (CCHL), COMO SE DEDUCE DE SU ANALISIS ESTRUCTURAL Y FUNCIONAL, Y SE DENOMINO CACYC3. EL ANALISIS DEL MUTANTE NULO PARA DICHO GEN, OBTENIDO MEDIANTE INTERRUPCION GENICA SECUENCIAL, DEMOSTRO QUE EL GEN CACYC3 CODIFICA PARA DOS PROTEINAS, UNA DE 33 KDA LOCALIZADA EN LA MITOCONDRIA (CCHL), Y OTRA, DE 40 KDA, PRESENTE EN LA PARED CELULAR. DICHO MUTANTE MUESTRA ADEMAS UN DEFECTO EN LA FORMACION DE TUBOS GERMINATIVOS, POR LO QUE SE SUGIERE SU IMPLICACION EN EL PROCESO DE TRANSICION MORFOLOGICA LEVADURA-MICELIO. LA RELACION ENTRE LOS PRODUCTOS DEL GEN CACYC3 Y EL EPITOPO RECONOCIDO POR EL MAB 4C12, AUNQUE AUN ESTA POR DETERMINAR, PARECE CLARA, YA QUE EL PATRON INMUNOREACTIVO CON EL MAB 4C12 ESTA ALTERADO EN EL MUTANTE NULO (LA BANDA DE 180 KDA DESAPARECE Y LA DE 260 KDA PIERDE POLIDISPERSIDAD). TAMBIEN SE HA DEMOSTRADO QUE EL GRUPO HEMO INDUCE LA FORMACION DE TUBOS GERMINATIVOS EN C. ALBICANS, POR LO QUE UNA DE LAS POSIBLES FUNCIONES DEL PRODUCTO DEL GEN CACYC3 PRESENTE EN LA PARED CELULAR SERIA LA DE RECEPTOR DE GRUPOS HEMO.