Modificacion de las propiedades cataliticas de beta-clucosidasas por mutagenesis dirigida

Resumen

Una importante utilidad de las técnicas de ingenieria de proteínas es la obtención de nuevos tipos de enzimas especialmente diseñados con vistas a su aplicación industrial. En una proteína, la contribución de residuos aminoacídicos individuales a su estabilidad y funcionalidad es un problema todavía sin resolver, sin embargo, la disponibilidad de genes clonados permite modificar las características de los enzimas codificadas por ellos, mediante técnicas de mutagénesis aleatoria y dirigida. En este trabajo de esta tesis doctoral se han modificado las propiedades de una Beta-glucosidasa codificadapor el gen bg1A de Paenibacillus plymyxa. Se ha puesto a punto dos métodos de -mutagénesis aleatoria para la modificación de las propiedades de Bg1A basados en la técnica de PCR. Mediante mutagénesis aleatoria se han aislado y caracterizado seis mutaciones distintas que aumentan la resistencia térmica de Bg1A. La combinación de las distintas mutaciones en una misma molécula nos ha permitido obtener un mutante múltiple de Bg1A con una vida media de tres minutos a 70 grados centígrados, que puede calificarse como enzima termorresistente. Una de las mutaciones, T385A además, produce un aumento de aproximadamente 20 veces la producción de enzima Bg1A por Escherichia coli.