Diferenciacion y caracterizacion molecular de aislados del virus de la tristeza de los citricos (ctv). Aplicacion al control de la enfermedad

Resum

CTV ES CAUSANTE DE LA TRISTEZA, UNA DE LAS ENFERMEDADES MAS GRAVES DE LOS CITRICOS. ESTE VIRUS PRESENTA UN GRAN NUMERO DE AISLADOS QUE SE DIFERENCIAN EN EL TIPO E INTENSIDAD DE SINTOMAS INDUCIDOS EN DISTINTOS HUESPEDES. PARA EL CONTROL DE LA ENFERMEDAD ES NECESARIO DISPONER UN METODO FIABLE, SENSIBLE Y RAPIDO QUE PERMITA DISCRIMINAR ESTOS AISLADOS. EN ESTE TRABAJO SE ENSAYARON DOS METODOS DE DIFERENCIACION: HIBRIDACION MOLECULAR Y SSCP (POLIMORFISMO DE DNA MONOCATENARIO). PARA EL PRIMERO SE CONSTRUYO UNA GENOTECA A PARTIR DEL AISLADO ESPAÑOL T385, A PARTIR DE LA CUAL SE OBTUVO UN PANEL DE SONDAS QUE SE ENSAYARON CON DISTINTOS AISLADOS DE CTV. SE DISEÑO UN PROGRAMA INFORMATICO (DOMUS) QUE PERMITIO SELECCIONAR UN PANEL DE 12 SONDAS QUE DIFERENCIO LA MAYOR PARTE DE LOS AISLADOS ANALIZADOS. POSTERIORMENTE SE PROCEDIO A LA PUESTA A PUNTO Y EVALUACION DE LA TECNICA DE SSCP, CONSIGUIENDOSE DISCRIMINAR DIVERGENCIAS DE SECUENCIA NUCLEOTIDICA DEL 0.14%. EL ANALISIS DE SSCP EVIDENCIO QUE ALGUNOS AISLADOS ESTAN COMPUESTOS POR UNA POBLACION HETEROGENEA Y PERMITIO OBSERVAR CAMBIOS POBLACIONALES OCURRIDOS EN ALGUNOS AISLADOS AL CAMBIAR DE ESPECIE HUESPED, AL SER TRANSMITIDOS POR PULGONES O POR UNA POSTERIOR INFECCION CON OTRO AISLADO. ESTO ULTIMO SE HA EMPLEADO COMO METODO DE CONTROL DE LA ENFERMEDAD, YA QUE PERMITE DETECTAR PRECOZMENTE LA INTERFERENCIA DE UN AISLADO VIRULENTO POR UN AISLADO ASINTOMATICO PREVIAMENTE INOCULADO. MEDIANTE EL ANALISIS DE SSCP Y LA SECUENCIACION DE ALGUNOS CLONES DEL GEN P20 SE REALIZO UNA ESTIMACION LA VARIABILIDAD DENTRO Y ENTRE AISLADOS DE CTV. POR OTRA PARTE LA SECUENCIACION DE ALGUNOS CLONES DE LA GENOTECA DE T385 Y SU COMPARACION CON LA SECUENCIA DEL GENOMA COMPLETO DE OTROS DOS AISLADOS, PERMITIO ESTIMAR LA DIVERGENCIA DE SECUENCIA EN DISTINTAS ZONAS DEL GENOMA.