Estudio de las bases moleculares del proceso de señalización por glucosa

Resumen

La hexoquinasa PII de la levadura Saccharomyces cerevisiae es una enzima fosforiladora de glucosa que además de su papel en la glicólisis tiene un papel adicional en la señalización por glucosa. Para estudiar los dominios que pueden participar en este último proceso construimos para estudiar los dominios que participan en este último proceso construimos once alelos mutantes de hexoquinasa PII. En la mayoría de ellos la actividad catalítica estaba directamente correlacionada con la señalización por glucosa. Sin embargo encontramos dos mutantes (A1-15 y A476-486) que teniendo baja actividad catalítica, eran totalmente funcionales en la señalización por glucosa. Por lo que ambas funciones, enzimática y señalizadora, no están directamente correlacionadas. La glucoquinasa pancreática humana (GlkB) también tiene función señalizadora de glucosa. Su actividad es importante para el mantenimiento de la homeostasis de la glucosa en mamíferos. Hemos observado que la glucoquinasa pancreática complementa los defectos de inducción como de represión en mutantes de levadura carentes de hexoquinasa PII. Lo que permite utilizar la levadura S.cerevisiae como modelo celular para el estudio de la glucoquinasa pancreática humana. Hemos observado que el complejo fosfatasa Reg1/Glc7 interacciona físicamente con Bmh2, miembro de la familia de proteínas 14-3-3. Bmh2 es una proteína que ha sido involucrada en la regulación de la localización subcelular de Msn2, un activador trasncripcional de genes regulados por estrés. Nosotros hemos visto que la proteina quinasa Snf1 participa en la regulación de la localización intracelular del factor transcripcional Msn2 convergiendo con la vía TOR. Finalmente, para identificar proteínas que interaccionan con Bmh2, realizamos un escrutinio de doble híbrido utilizando como cebo LexA-Bmh2. De este modo identificamos Fin1, una proteína del filamento intermedio, como la proteína que mostr