Optimización de métodos cromatográficos para la determinación de aminoácidos y tioles

Abstract

Los aminoácidos proteicos primarios constituyen un conjunto de compuestos particularmente complejo bajo el punto de vista analítico. Su papel de constituyentes esenciales de la materia viva implica que los análisis deben siempre extenderse a la serie completa, de lo que se concluye la necesidad de técnicas de separación poderosas, capaces de aislar convenientemente las señales de todos y cada uno de los 19 analitos potencialmente presentes en cualquier muestra. Ello explica la prevalencia de los métodos cromatográficos para su análisis. Tanto los aminoácidos proteicos primarios como sus derivados son particularmente diversos bajo el punto de vista cromatográfico, convirtiendo a las separaciones basadas en la elución isocrática en virtualmente inaplicables. De esta inoperancia se desprenden como alternativas, bien el uso de elución en gradiente, o bien, modos cromatográficos capaces de atenuar las diferencias de polaridad. Hasta la fecha, no se ha conseguido resolver de una manera plenamente satisfactoria los distintos problemas que plantea el análisis de estos compuestos. En esta Tesis se intenta dar respuesta a algunos de ellos, en especial a la mejora de las separaciones cromatográficas, con la ayuda de técnicas matemáticas. La Memoria de Tesis Doctoral consta de tres partes: La primera parte estudia la reacción derivatizante más extendida en cromatografía líquida en fase inversa para el análisis de aminoácidos, que forma isoindoles utilizando una mezcla de o-ftaldehido y un tiol. Estos derivados se pueden separar y detectar con facilidad. Sin embargo, la naturaleza del tiol influye fuertemente en la cinética de formación y degradación, por lo que en un primer estudio se examinaron las características de la reacción con 10 tioles. Colateralmente, se desarrolló una aplicación en la que el analito era el propio tiol, en lugar del aminoácido. La segunda parte se centra en la mejora de las separaciones