Tráfico de proteínas en células vegetalesmecanismos que determinan la inclusión de proteínas de membrana en vesículas recubiertas de copi o copii

Resumen

En la presente Tesis, hemos caracterizado las proteínas de la cubierta COPI y COPII en células vegetales y hemos investigado las señales de clasificación en proteínas de membrana que determinan su inclusión en vesículas recubiertas de uno u otro tipo de proteínas. En primer lugar, hemos comprobado que las proteínas de la cubierta COPI se distribuyen en fracciones de membranas y citosol en células vegetales y constituyen un complejo citosólico análogo al coatómero de células animales, que se recluta a membranas como una única unidad. El coatómero de células vegetales se une de forma específica a motivos de dilisina presentes en la posición -3,-4 respecto del extremo carboxi-terminal de proteínas de membrana de tipo I, que actúan como señales de retención en el retículo endoplasmático tanto en células animales como en levaduras y en células vegetales. Un motivo de difenilalanina en posición -7,-8 respecto del extremo carboxi-terminal actúa cooperativamente con el motivo de dilisina en el reclutado del coatómero de células vegetales. En células vegetales la unión del coatómero a membranas está mediada por el factor de ribosilación del ADP (ARF1) en su forma GTP. Así mismo, ARF1 es reclutado por la cola citosólica de proteínas de la familia p24 en su forma GDP, gracias a motivos de dilisina y difenilalanina actuando de forma cooperativa. Todas las proteínas de la familia p24 de células vegetales contienen motivos de difenilalanina y de dilisina que actúan cooperativamente para el reclutado eficiente del coatómero y de ARF1, sugiriendo que dichas proteínas son también empaquetadas eficientemente en vesículas recubiertas de COPI en células vegetales. El reclutamiento de ARF1 a las membranas podría ocurrir mediante una interacción directa entre ARF1-GDP y las colas citosólicas de las proteínas p24. En esta interacción son esenciales los motivos de dilisina y difenilalanina.