Desarrollo de un vector no viral para la transferencia selectiva de ácidos nucleicos en líneas celulares de linfoma humano

Resum

La entrega específica y eficiente de ácidos nucleicos a las células diana es uno de los objetivos prioritarios de la terapia génica no viral. Aunque los poliplejos (complejos ácidos nucleico-polímero catiónico) basados en polietilenimina han demostrado ser buenos agentes de transfección, la entrega del ADN mediada por poliplejos sucede de forma inespecífica y resulta además especialmente ineficiente en la transfección de algunos tipos celulares, como las células hematopoyéticas. En este trabajo se recoge la construcción de un inmunopoliplejo, un vector no viral dirigido basado en un esqueleto polipléjico y su aplicación en la transferencia de ácidos nucleicos (genes y oligonucleótidos) a diversas líneas celulares derivadas de linfomas humanos. La principal característica del inmunopoliplejo reside en la posibilidad de reemplazar fácilmente el elemento direccionador (un anticuerpo biotinilado, en el cual reside la capacidad de unión específica a la membrana de la célula diana) sin necesidad de alterar el esqueleto del vector. Esto sucede porque al polímero catiónico polietilenimina (PEI) se le ha unido covalentemente la proteína strptavidina (St), cuya misión es la de actuar como punto de anclaje al poliplejo de cualquier proteínas biotinilada, a través de la interacción específica streptavidina-biotina. La actividad de transfección de los inmunopoliplejos fue estudiada in vitro en la transferencia tanto de genes (empleado el gen de la proteína fluorescente verde como marcador) como de oligonucleótidos (marcados con fluoresceína) a diversas líneas celulares linfocitarias humanas que son fenotípicamente distintas respecto a la presencia de los antígenos CD3 y CD19 en su superficie: las líneas celulares de tipo T (Jurkat (CD3+, CD19-) y JRT3 (CD3-, CD19-) y la de tipoB (Granta 519, pues es CD3-, CD19+). Como elementos direccionadores del inmunopoliplejo se utilizaron los anticuerpos biotinilados anti-C