El gen carps0 en la identificación de candida albicans y otras especies fungicas mediante pcr y clonación del gen homólogo en candida tropicalis

Resumen

A partir de la secuencia nucleotídica del intrón del gen CaRPS0 de Candida albicans se ha diseñado una pareja de oligonucleótidos cebadores que se ha empleado en un análisis de PCR sobre DNA genómico y células enteras de especies del género Candida y otros microorganismos. En todos los aislados clínicos de C. Albicans se generó el amplicón de 310 pb esperado; en otroas especies de Candida, así como en otras cepas de laboratorio pertenecientes a otros hongos, no se generó ningún amplicón excepto en los casos de C.pseudotropicalis (amplicón de 1200 pb), Kluyveromices marxianus (amplicón de 1250 pb) y Cryptococcus neoformans (varios amplicons mayores de 1250 pb). En aislados poco comunes de C.albicans procedentes de Africa también se generó el albicón de 310 pb esperado. Estos resultados indican que los genes que presentan intrones pueden ser de utilidad en el diseño de oligonucleótidos cebadores, específicos de especie, para la identificación mediante PCR de cepas fúngicas. La sensibilidad del método se evaluó empleando diferentes cantidades (de 224 ng a 2.7 pg) e DNA de C.albicans así como de distintas cantidades de células (de 10(7) a 5). Los resultados obtenidos pueden ser útiles en una detección temprana de candidiasis. Los genes RPS0 A y B de Saccharomyces cerevisiae codifican proteínas esenciales para la maduración de la subunidad ribosomal 40S. Hemos aislado el gen homólogo a RPS0 en C.tropicalis y lo hemos denominado CtRPS0. El gen CtRPS0 codifica para una proteína de 261 resíduos aminoacídicos con un tamaño molecular teórico de 28.65 kDa y un punto isoeléctrico de 4.79. La proteína CtRsp0 presenta una elevada homología con C.albicans, S.cerevisiae, Neurospora crassa, Schizosaccharaomyces pombe, Pneumocystis carinni y otros organismos como humanos, ratón y rata. CtRPS0, en un vector de elevado número de copias, es capaz de complementar el fenotipo letal unido a la disrupción de los dos ge