Estudio de la gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (gapdh) de c.Albicans y s.Cerevisiae como proteína de la pared celular

Résumé

En la tesis se aborda la caracterización de la gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) como proteína de la pared celular de las especies fúngicas Candida albicans y Saccharomyces serevisiae. La presencia de la GAPDH en la pared celular de C.albicans ya había sido descrita anteriormente por nuestro grupo. En primer lugar, se ha demostrado que la GAPDH de C.albicans, proteína mayoritariamente citosólica y que carece de péptido señal responsable de su posible secreción, es capaz de dirigir su incorporación a la pared celular, y se ha identificado la región de la proteína que contiene los dominios responsables de dicha incorporación. Mediante una aproximación genética, usando la invertasa interna como proteína "reporter" para la expresión heteróloga de proteinas de fusión GAPDH-invertasa en una cepa Suc de S.cerevisiae, se ha demostrado que primera mitad (N-terminal) de la estructura primaria de la proteína contiene las señales responsables de la secreción de la GAPDH a la pared celular. Por otra lado, se ha descrito por primera vez la presencia de la GAPDH en la pared celular de S.cerevisiae. El estudio de la GAPDH de S.cerevisiae en esta nueva localización ha permitido demostrar que los productos de los tres genes TDH (TDH1-3) que codifican para la GAPDH, están asociados a la pared celular. Por último, se ha realizado un estudio de la expresión de la GAPDH en la superficie celular de C.albicans y S.cerevisiae en respuesta a diferentes condiciones ambientales, tales como estrés térmico y nutricional. Ambos factores producen un aumento de la actividad GAPDH asociado a la parede celular: dicho aumento se debe a un aumento en la cantidad de proteína presente en la pared celular, y es independiente de la síntesis proteica de la ubiquitina de respuesta a estrés.