Caracterización de dos proteínas de pared celular de las familias pir (pir-cwps) y gpi (gpi-cwps) en yarrowia lipolytica y aislamiento de una cepa ylmnn9 deficiente en glicosilación

Resumo

Yarriwua lipolytica es un hongo dimórfico que está catalogado dentro de lo que se ha venido a denominar grupo de las "levaduras no convencionales". Al igual que Saccharomyces cerevisiae, la levadura del pan, el vino y la cerveza, Y.lipolytica está considerado como organismo segura (GRAS, "Generally Regarded As Safe") en procesos alimentarios, lo que permite también su utilización en distintos procesos industriales, tales como la obtención de ácido cítrico. A diferencia de S.cerevisiae, Y. Lipolytica es dimórfico y secreta de forma natural una gran cantidad de enzimas, por lo que constituye un buen modelo para el estudio del dimorfismo y es también un hospedador idóneo para la expresión de proteínas recombinantes. La pared celular juega un papel importatne tanto en la transición dimórfica, por ser en último extremo la estructura responsable de la forma de la células, como en la secreción de proteínas, por ser una barrera que limita este proceso. Sin embargo no existen tan apenas estudios sobre estructura en Y.lipolytica, y es por ello que el objetivo de la tesis que se presenta era precisamente contribuir a rellenar este hueco. Los resultados obtenidos consisten en la caracterización de dos proteínas que forman parte de la pared celular, el aislamiento de los genes que las codifican y la caracterización del fenotipo resultante de la disrupción de los mismos. Las dos proteínas caracterizadas son homólogas a dos proteínas de pared celular de S.cerevisiae, pertenecientes respectivamente a las dos familias de proteínas de pared celular (CWPs) mayoritarias en este organismo, la de las PIR-CWPs y las de las GPI-CWPs. Este resultado parece indicar que existe una similitud en la estructura de la pared celular en S.cerevisiae y Y.Lipolytica y abre la posibilidad de caracterizar nuevos homólogos y de plantear un modelo de estructura basado en la de la pared celular de S.cerevisiae. Finalmente, se ha aislado un gen implicado