Inmovilización de ligandos, enzimas y antígenos recombinantes en la pared celular de saccharomyces cerevisiae mediante técnicas de ingeniería genética

Laburpena

Saccharomyces cerevisiae es la levadura del pan, de la cerveza y del vino y en tal papel se ha venido utilizando desde las primeras sociedades agrícolas. En los últimos años, y gracias al desarrollo de la ingeniería genética, S.crevisiae ha añadido a sus usos tradicionales el de servir de hospedador para la producción de proteínas heterólogas. Las células de S.cerevisiae estan rodeadas por la pared celular, en cuya composición destacan las manoproteínas, las cuales deben necesariamente ser secretadas para llegar a su destino final, por lo que contienen tanto secuencias que determinan su secreción, así como secuencias que determinan su retención en la pared celular, y que vienen determinadas por el extremo carboxi-terminal de dichas proteínas. Estas secuencias pueden ser utilizadas para dirigir la localización de proteínas heterólogas a la pared celular, premisa en la que se basa este trabajo, el cual consistió en utilizar las señales de secreción y de retención a la pared celular de dos proteínas caracterizadas anteriormente por nuestro grupo, Pir4, una proteína extraíble por agentes reductores, e Icwp, una proteína GPI, para determinar la secreción, o en su caso la localización en la pared celular de distintas proteínas recombinantes con aplicación en biotecnología, tal como un ligando específico que permitiese la inmovilización de las células en una matriz sólida, una enzima activa o un antígeno de un microorganismo patógeno, aproximaciones que han dado lugar a los tres capítulos de que consta esta tesis: 1,- Inmovilización de células de Saccharomyces cerevisiae en una matriz de proteína G.Sefarosa mediante Ingeniería Genética de la pared celular. 2,- Expresión de la xilanasa a de Bacillus sp. BP-7 en Saccharomyces cerevisiae en forma de proteína de fusión con la proteína de la pared celular Pir4. 3,- Expresión de un antígeno viral de la cápsida del rotavirus SA11 en Saccharomyces