Regulación de genes de e. Coli implicados en replicación del dnadependencia de rpos y caracterización de mnme

Resumen

En el laboratorio de Genética Molecular de la FVIB hemos estado estudiando durante los últimos años la regulación de genes esenciales para la replicación del cromosoma de Escherichia coli. En concreto, yo me he encargado de analizar la regulación del gen dnaN, codificador del factor de procesividad de las replicasa bacteriana, y de caracterizar el gen MnmE, implicando en la regulación de dnaX, el gen codificador de las subunidades gamma y * de la replicasa. El producto del gen dnaN es la subunidad beta que es la responsable de la alta procesividad de la DNApolimerasa III. El gen dnaN se encuentra localizado en el operón dnaA. La actividad beta-galactosidasa de las fusiones que contienen las regiones promotoras de dnaN y recF aumentó durante la transción a la fase estacionaria. Esta inducción es independiente mayoritariamente de rpoS en el caso de dnaN pero no en el caso de promotores de recF esta inducción estacionaria no es consecuencia de la disminución de la velocidad de crecimiento que tiene lugar en esta transición. Tres de los cuatro promotores de dnaN se inducen durante la entrada en la fase estacionaria o por el crecimiento en medio hiperosmótico y esta inducción depende de RpoS: la acumulación de RposS no es suficiente para provocar la inducción de los promotores de dnaN a baja temperatura, y proponemos que la inducción de dnaN requiere factores adicionales a RposS en estas condiciones. Previamente había sido propuesta una secuencia consenso para el reconocimiento por O38 que consistiría en una secuencia -10 CTATACT, una región corriente arriba que presentará una curvatura intrínseca y una región -35 no sería necesaria. La región promotora de dnaN carece de una curvatura intrínseca, sin embargo, la región -35 de los promotores de dnaN es crucial para que tal activación acontezca. En la segunda parte de esta Tesis se ha presentado la caracterización bioquímica y funcional de MnmE. Nuestros result