Gpbp-interacting proteins (gips)una nueva familia de factores de transcripción con relevancia en autoinmunidad y cáncer

Resumen

La enfermedad de Goodpasture es un proceso autoinmunitario exclusivamente humano que se caracteriza por la deposición de autoanticuerpos sobre las membranas basales glomerular y renal. Los autoanticuerpos van dirigidos exclusivamente contra el globular C terminal de la cadena a3 del colágeno de tipo IV, que es el componente principal de las membranas basales. Este dominio contiene una región altamente divergente si se compara con las demás cadenas a del colágeno IV humano o con cadenas a3 de otras especies, lo que indicaba que podía tener un papel relevante en el desarrollo de la enfermedad. Utilizando un péptido que representaba esta región y un anticuerpo monoclonal desarollado contra este se clonó mediante una librería de expresión la proteína GPBP (Goodpasture antigen- binding protein), una Ser/Thr quinasa atípica que es capaz de unir y fosforilar el antígeno de Goodpasture, y que además cataliza su isomerización conformacional y su agregación supramolecular. Usando la proteína GPBP como cebo se realizó una búsqueda de mensajes interactivos con el sistema dos-híbridos en levadura, y se clonó GIP90 (GPBP- interacting protein 90 kDa), cuyos rasgos principales eran una región con alta probabilidad de formación de superhélices que incuía dos cremalleras de leucina, y dos señales bipartitas de localización nuclear. GIP90 presentaba homología con dos polipéptidos anteriormente descritos con expresión disminuida en cáncer de ovario (downregulated in ovarian cancer-1 o DOC-1). La expresión de GIP90 era especialmente elevada en músculo estriado según se evidenció con estudios con membranas Northern prefabricadas, mientras que DOC-1 tenía una expresión más amplia GIP90 recombinante interacciona in vitro con GPBP, y es fosforilaba por esta última. También pudimos comprobar interacción ex vivo con GPBP en células HEK 293 mediante experimentos de inmunoprecipitación, y colocalización en célula