Mecanismos de degradación intracelular de las proteínas mitocondrialesestudio sobre el proceso de recambio de la Ornitina Transcarbamilasa

Abstract

MEDIANTE LA TECNICA DE LOS COMPLEJOS PROTEINA A-ORO COLOIDAL SE HA DETERMINADO INMUNOCITOQUIMICAMENTE LA LOCALIZACION INTRACELULAR DE OTC, GDH Y CPS I EN CELULAS DE HIGADO DE RATA, ASI COMO SUS CONCENTRACIONES RELATIVAS. LA DISTRIBUCION DE LAS MITOCONDRIAS EN UN HEPATOCITO DE RATA, DE ACUERDO CON EL NUMERO DE PARTICULAS DE ORO POR MICRA CUADRADA PARA CADA UNA DE LAS TRES ENZIMAS ESTUDIADAS, SE AJUSTA ESTADISTICAMENTE A UNA DISTRIBUCION NORMAL, PONIENDO DE MANIFIESTO LA EXISTENCIA DE UNA HOMOGENEIDAD EN LA POBLACION INTRACELULAR DE MITOCONDRIAS. LA VIDA MEDIA DE LA OTC, DETERMINADA POR EL METODO DEL DOBLE ISOTOPO, HA RESULTADO SER DE 8,7 DIAS UTILIZANDO LAS KD QUE SE OBTIENEN MEDIANTE EL MARCAJE CON (GUANIDINO-14C) ARGININA, Y DE 3,9 DIAS UTILIZANDO LAS KD QUE PROPORCIONA EL MARCAJE CON (14C) CARBONATO. LOS LISOSOMAS SON LA UNICA FRACCION SUBCELULAR CAPAZ DE INACTIVAR LA OTC, INACTIVACION QUE ES ESTIMULADA POR ATP Y OTROS NUCLEOTIDOS DE PURINA QUE CONTENGAN ENLACES RICOS EN ENERGIA, ESPECIALMENTE POR EL E-ATP. ESTA ESTIMULACION TIENE LUGAR EN EL INTERVALO DE CONCENTRACIONES FISIOLOGICAS DEL ATP, NO NECESITA LA PRESENCIA DE IONES MAGNESIO Y SOBRE ELLA NO TIENEN EFECTO ALGUNO NI LOS INHIBIDORES DE ATPASAS LIGADAS A MEMBRANAS NI LOS DE LAS SOLUBLES. EL CARBAMIL FOSFATO PROTEGE TOTALMENTE A LA OTC DE SU INACTIVACION Y PROTEOLISIS POR LISOSOMAS, INCLUSO EN PRESENCIA DE ATP, QUE NO HACE SINO AUMENTAR LA AFINIDAD DE LA ENZIMA POR DICHO SUBSTRATO. EL EFECTO DEL ATP SE PRODUCE SOBRE LA OTC, NO SOBRE EL SISTEMA PROTEOLITICO LISOSOMAL, Y LLEVA ASOCIADA LA HIDROLISIS DE AQUEL. LA INACTIVACION DE LA OTC POR LISOSOMAS ORIGINA, INICIALMENTE, DOS FRAGMENTOS PEPTIDICOS DE PESOS MOLECULARES 24.000 Y 15.000 RESPECTIVAMENTE, Y VA SEGUIDA DE UNA EXTENSA PROTEOLISIS. EL ANALISIS DE LA SECUENCIA DE AMINOACIDOS DE LA OTC, REVELA LA EXISTENCIA DE POTENCIALES SITOS DE FOSFORILACION Y DE UNA POSIBLE SECUENCIA PEST QUE AFECTARIAN A LAS INMEDIACIONES DEL LUGAR