Proteinas P35 y P60 diferenciadoras de virus herpes simplex tipos 1 y 2, identificación por anticuerpos monocionales

Resumen

EXISTEN DOS TIPOS DE VIRUS HERPES SIMPLEX (VHS) VHS-1 Y VHS-2 DIFERENCIABLES POR METODOS BIOLOGICOS BIOQUIMICOS E INMUNOLOGICOS. LA ANTIGENICIDAD DE LAS PROTEINAS DE VHS-1 Y DE VHS-2 DETECTADAS POR ANTICUERPOS MONOCLONALES ES ACTUALMENTE EL METODO MAS ASEQUIBLE DE DIFERENCIACION ENTRE AMBOS TIPOS. HEMOS INVESTIGADO PROTEINAS ESPECIFICAS DE VHS-1 Y VHS-2 QUE PERMITAN SU DIFERENCIACION OBTENIENDO ANTICUERPOS MONOCLONALES FRENTE A DICHAS PROTEINAS. LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES (AC.MO) FUERON OBTENIDOS FUSIONANDO CELULAS DE MIELOMA P3 X 63.AG 8.653 (AG8) Y LINFOCITOS PROCEDENTES DEL BAZO DE ANIMALES INMUNIZADOS CON CEPAS VHS-1 (CEPA VR3) Y VHS-2 (CEPA MS-1). PARA OBTENER LOS AC.MO. FUERON EVALUADAS VARIAS PAUTAS DE INMUNIZACION DE DOSIS Y TIPO DE ANTIGENO VIA DE INOCULACION METODO DE FUSION CELULAR ETC. ELIGIENDO FINALMENTE UN ANTIGENO SOLUBLE A RAZON DE 10.2 UFP/ML POR VIA INTRAPERITONEAL. LAS CELULAS DE MIELOMA Y LOS LINFOCITOS ESPLENICOS FUERON FUSIONADOS EN PRESENCIA DE POLIETILENGLICOL-1500 AL 50%. LOS CLONES FUERON SELECCIONADOS CON MEDIO HAT Y LA PRODUCCION DE ANTICUERPOS MONOCLONALES FRENTE A VHS-1 O VHS-2 FUE DETECTADA MEDIANTE ELISA PARA DETECTAR INMUNOGLOBULINAS DE RATON E INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA. OBTUVIMOS CLONES PRODUCTORES DE ANTICUERPOS MONOCLONALES (23G10 Y 32 D9) ESPECIFICOS DE VHS-1 Y VHS-2 CON UNA ACTIVIDAD ESPECIFICA DE AMBOS DE 12.800 U/MG Y DE 6.400 U/MG RESPECTIVAMENTE. EL PRIMERO DE ELLOS ES DE LA SUBCLASE IGG2A Y EL SEGUNDO IGG2B DETERMINADO MEDIANTE INMUNODIFUSION RADIAL. LA IDENTIFICACION INMUNOQUIMICA DE LA PROTEINA DETECTADA POR LOS ANTICUERPOS MONOCLONALES SE REALIZA MEDIANTE SEPARACION ELECTROFORETICA EN GEL DE POLIACRILAMIDA TRANSFERENCIA A MEMBRANA DE NITROCELULOSA Y REACCION INMUNOENZIMATICA. EL ANTICUERPO DEL CLON 23G10 RECONOCE UNA PROTEINA DE 35.000 DALTONS ESPECIFICA DE VHS-1 Y EL ANTICUERPO DEL CLON 32D9 RECONOCE UNA PROTEINA ESPECIFICA DE VHS-2 DE 60.000 DALTONS. HEMOS DEMOSTRADO