Estudio del gen WT1 en la leucemia mieloblástica aguda

Resumen

En los últimos años se ha producido un notable progreso en la elucidación de la patogénesis molecular de las Leucemias Mieloblásticas Agudas (LMA). Sin embargo, la mayoría de las alteraciones genéticas que subyacen en esta patología son todavía desconocidas. La LMA se caracteriza por la presencia de un “stop madurativo” de las células de la línea mieloide, que escapan de la inhibición de las señales anti-proliferativas y adquieren una capacidad indefinida de auto-renovación. Los posibles mecanismos que pueden explicar el crecimiento incontrolado de las células cancerígenas son la pérdida de función de los genes supresores de tumores y/o la activación de los oncogenes. Aunque ambas son funciones opuestas que en principio deberían ser mutuamente excluyentes en una misma proteína, existen evidencias de que una misma proteína puede mostrar ambas funciones bajo condiciones celulares diferentes. Un ejemplo de ello es el gen del tumor de Wilms (WT1), el cual presenta este tipo de comportamiento dual dependiendo del tipo celular donde se está expresando. El gen WT1 fue originariamente definido como un gen supresor tumoral al encontrarse mutado en un 15% de los tumores de Wilms. Sin embargo, el estudio del papel de WT1 en las células cancerígenas ha revelado un inesperado papel como oncogén. La mayoría de estudios se ha realizado en casos de leucemia donde se ha demostrado la importancia biológica y clínica de WT1 en la supervivencia, diferenciación y proliferación celular. En la presente tesis se ha estudiado a un total de 274 pacientes diagnosticados de LMA de novo en un sólo centro para analizar en profundidad el papel de la expresión total de WT1, la expresión de sus 4 isoformas principales, las variaciones genéticas del gen, tanto mutaciones como el polimorfismo SNP rs16754 y la expresión de los miRNA que podrían estar involucrados en la regulación epigenética de WT1, con el objetivo de elucidar el papel de WT1 en la leucemogénesis. Los resultados de esta tesis muestran una expresión de WT1 total mayor en la leucemia en comparación con su contrapartida sana de células CD34+ de sangre de cordón umbilical, que, además, parece conferir una peor supervivencia a los pacientes que pertenecen al subgrupo FAB M0. En cuanto a las cuatro isoformas principales de WT1, los resultados de esta tesis parecen sugerir que dicha sobreexpresión de WT1 total pueda ser debida a un aumento en la expresión de las isoformas A, B y/o C junto a una disminución relativa de la isoforma D. Además, la mejor supervivencia observada en los pacientes que sobreexpresan la isoforma D hace presuponer que dicha isoforma pueda tener un papel protector en la LMA, aunque este resultado debería ser confirmado con futuros estudios funcionales. Tras el cribado de alteraciones genéticas de WT1 por High Resolution Melting, se encontró la presencia de un 30% de pacientes con la presencia del SNP rs16754 de WT1 en heterocigosis, consistente con lo esperable en la población caucásica. La presencia del alelo menor de dicho SNP no mostró diferencias significativas en términos de supervivencia. Además se detectaron mutaciones del gen WT1 en el 4% de la serie de pacientes, asociándose con un valor pronóstico desfavorable independiente en la serie global. Para averiguar los posible microRNAs potencialmente implicados en la regulación epigenética de WT1 se hibridaron chips de arrrays de miRNA en 10 muestras de pacientes seleccionados en función de su expresión de WT1 total, encontrándose 9 miRNAs con expresión diferencial que fueron validados mediante PCR cuantitativa en la serie de pacientes y controles. Los resultados de la validación sugieren que algunos de los microRNAs estudiados presentan patrones de expresión diferentes a la normalidad pudiendo estar implicados en la regulación de la diferenciación celular. Además, se observó una mejor supervivencia para la infraexpresión de los miR-223, miR-425, miR-500 y miR-1307 en la serie global, aunque no se pudo demostrar su valor pronóstico independiente.