Sistemas enzimáticos implicados en el grado de acetilación de las histonas en Saccharomyces cerevisiae

Resumen

EN EL PRESENTE TRABAJO SE HA ESTUDIADO LA ACTIVIDAD HISTONA ACETILTRANFERASA (HAT) COMPLETANDOSE ASIMISMO EL REALIZADO CON LA HISTONA DESACETILASA (HD) EN LALEVADURA SACCHAROMYCES CEREVISIAE. PARA LA OBTENCION DE LAS ACTIVIDADES HAT Y HDSE HAN EMPLEADO TRES PROCEDIMIENTOS: PRECIPITACION CON SULFATO AMONICO AL 90 % DE SATURACION PRECIPITACION DIFERENCIAL CON EL 10 Y EL 20 % DE POLIETILENGLICOLY ULTRACENTRIFUGACION EN PRESENCIA DE NACL 0.5 M DE EXTRACTOS PROTEICOS OBTENIDOS A PARTIR DE PROTOPLASTOS. MEDIANTE CROMATOGRAFIA EN COLUMNA EN DEAE-SEPHAROSE DE LOS CUATRO EXTRACTOS PROTEICOS Y ANALISIS DE LAS MANCHAS FLUOROGRAFICAS CORRESPONDIENTES A LA ACETILACION ENZIMATICA DE LAS HISTONAS EN PRESENCIA DE (1-ELEVADO A 14 C) ACETIL COA CONVENIENTEMENTE CORREGIDO MEDIANTE UN ANALIZADOR DE IMAGENES IBAS 2000 SE PUEDE CONCLUIR QUE EN ESTE ORGANISMO EXISTEN AL MENOS 4 ACTIVIDADES HAT DENOMINADAS AI AII BI Y BII Y UNA ACTIVIDAD HD. LA AI ES UN ENZIMA NUCLEAR ACTIVO CON NUCLEOSOMAS QUE ACETILA A LA HISTONA H2B DE LEVADURA (H2A CON ERITROCITO) Y EN MENOR MEDIDA A H4. LA AIIES NUCLEAR FUERTEMENTE UNIDA A CROMATINA QUE ACETILA A LA HISTONA H3. LA BI ESASIMISMO NUCLEAR ACTIVA CON NUCLEOSOMAS QUE ACETILA A H4 H3. FINALMENTE LA BII ES CITOPLASMATICA INACTIVA CON NUCLEOSOMAS Y ESPECIFICA PARA H4. LAS ACTIVIDADES HAT AI Y AII AUMENTAN DURANTE LA FASE EXPONENCIAL DE LA CURVA DE CRECIMIENTO DISMINUYENDO POSTERIORMENTE EN FASE ESTACIONARIA. SIN EMBARGO EL AUMENTO EN LA AII ES UNAS 50 VECES MAYOR QUE EN LA AI. POR OTRA PARTE LAS BI Y BII POSEEN UN COMPORTAMIENTO DIFERENCIAL DURANTE LA CURVA DE CRECIMIENTO YA QUE LA BII AUMENTA EN FASE EXPONENCIAL Y DISMINUYE EN FASE ESTACIONARIA Y NO ESTARIAN RELACIONADA CON UNA MISMA FUNCION BIOLOGICA AUNQUE AMBAS ACETILEN PREFERENTEMENTE A H4. POR TANTO EN LOS SISTEMAS BIOLOGICOS LA REGULACION DEL NIVEL DE ACETILACION DE LAS HISTONAS PARECE TENER UNA MAYOR COMPLEJIDAD QUE LA OBSERVADA HASTA EL MO