Síntesis in vitro del precursor de la Ornitina Transcarbamilasaestudio de su transporte a mitocondrias aisladas

Résumé

SE HA ESTUDIADO EL TRANSPORTE A LA MITOCONDRIA DEL PRECURSOR CITOSOLICO DE LA ORNITINA TRANSCARBAMILASA DE HIGADO DE RATA (POCT) LLEGANDOSE A LAS SIGUIENTES CONCLUSIONES: 1) SE HA CLONADO EL ADNC DE POCT EN EL SISTEMA DE TRANSCRIPCION IN VITRO SP6 LO QUE HA PERMITIDO SINTETIZAR EL ARNM ESPECIFICO DE POCT. 2) SE HA SINTETIZADO POCT EN UN SISTEMA DE SINTESIS DE PROTEINAS IN VITRO CONSTITUYENDO EL UNICO PRODUCTO DETECTADO MEDIANTE ELECTROFORESIS Y FLUOROGRAFIA EN CANTIDAD SUFICIENTE PARA PODER REALIZAR ESTUDIOS SOBRE SU TRANSPORTE A LA MITOCONDRIA. 3) EL PRECURSOR SINTETIZADO ES TRANSPORTADO AL INTERIOR DE MITOCONDRIAS AISLADAS DE HIGADO DE RATA DONDE ES CONVERTIDO A SU FORMA MADURA. 4) EL ESTUDIO DE LAS CONDRICIONES REQUERIDAS EN EL MEDIO DE INCUBACION PARA QUE TENGA LUGAR EL TRANSPORTE DEL PRECURSOR DEMUESTRAN QUE: - LAS POLIAMINAS ESPERMIDINA ESPERMINA Y PUTRESCINA ESTIMULAN EL TRANSPORTE DE POCT A MITOCONDRIAS AISLADAS SIENDO LA PRIMERA VEZ QUE SE RELACIONAN ESTAS POLIAMINAS ALIFATICAS CON EL TRANSPORTE DE PRECURSORES CITOSOLICOS A LA MITOCONDRIA. - ES POSIBLE UTILIZAR UN EXTRACTO CITOSOLICO DE HIGADO DE RATA COMO MEDIO DE TRANSPORTE CONSTITUYENDO UN MEDIO MAS FISIOLOGICO QUE EL LISADO DE RETICULOCITOS UTILIZADO HASTA AHORA. - EL APOCITOCTOMO C COMPITE CON POCT POR LA ENTRADA A MITOCONDRIAS AISLADAS LO QUE SUGIERE QUE AMBOS PRECURSORES COMPARTEN EL MISMO SISTEMA DE TRANSPORTE A LA MITOCONDRIA A PESAR DE PRESENTAR CARACTERISTICAS MUY DIFERENTES. - SE HA COMPROBADO QUE POCT DE HIGADO DE RATA ES IMPORTADO POR MITOCONDRIAS AISLADAS DE HIGADO DE PALOMA UN ANIMAL UREOTELICO QUE CARECE DE OCT LO CUAL APOYA LA IDEA DE UN SISTEMA GENERAL DE TRANSPORTE PARA LOS PRECURSORES DE LAS PROTEINAS MITOCONDRIALES.