Caracterización molecular y funcional de una nueva interacción entre el inhibidor de ciclo celular p27 y snx6, una proteína involucrada en el tráfico intracelular

Résumé

La proteína p27 es un importante inhibidor del ciclo celular que juega un papel clave en la transición G1-S y la proliferación del ciclo celular. Su regulación está gobernada por multitud de mecanismos, entre los que cabe destacar su degradación proteica por la ruta ubicuitín-proteasoma a través de diferentes interacciones con otras proteínas. El objetivo principal de los trabajos efectuados en esta tesis doctoral ha sido la identificación de nuevas dianas de interacción de la proteína p27. Nuestro abordaje experimental nos ha permitido identificar la interacción entre p27 y SNX6, una proteína involucrada en el tráfico proteico a través de la ruta endolisosomal. Mediante ensayos de doble híbrido en levadura y ensayos de arrastre con GST hemos identificado los dominios responsables de dicha interacción. Estudios de expresión y localización subcelular por inmunofluorescencia en células 3T3 y HeLa nos han permitido demostrar que SNX6 y p27 colocalizan y que ambas proteínas se encuentran en los diferentes orgánulos de la ruta endolisosomal. Además hemos analizado los efectos de los inhibidores de la degradación lisosomal sobre la expresión de p27 y los efectos de la ganancia y pérdida de función de SNX6 sobre la expresión de p27 y la progresión del ciclo celular. Nuestros resultados nos permiten proponer una nueva vía de degradación de p27 a través de la ruta endolisosomal que transcurre en el citoplasma y durante la fase G1.